本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定水體中孔雀石綠殘留量的高效液相色譜檢測方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于水體中孔雀石綠殘留量的檢測。？[第1頁] ICS 6 7.050 B 5024200-2009 DB44 廣 東 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn) DB44/T 570-2008 水體中孔雀石綠殘留量的測定 　　— —液相色譜熒光法 Determination of malachite green residues in fishery water by high performance 　　　　　　liquid chromatography with fluorescence detector 2008-12-31發(fā) 布 2009-04-01實(shí) 施 廣東省質(zhì)量技術(shù)」監(jiān)督局發(fā)布 [第2頁] DB44/T 570-？ 2008 月 IJ舀 本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為資料性附錄 。 本標(biāo)準(zhǔn)由廣東省海洋與漁業(yè)局提出 。 本標(biāo)準(zhǔn)由中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)研究中心歸口 。 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所 。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：岑劍偉 、 楊賢慶 、 李來好 、 郝淑賢 、 石紅 、 馬海霞 、 戚勃 、 孫滿義 。 [第3頁] DB44/T 570-？ 2008 水體中孔雀石綠殘留量的測定液相色譜熒光法 1范圍 　　本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定水體中孔雀石綠殘留量的高效液相色譜檢測方法 。 　　本標(biāo)準(zhǔn)適用于水體中孔雀石綠殘留量的檢測 。 2規(guī)范性引用文件 　　下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其隨后所有的 修改單 （ 不包括勘誤的內(nèi)容 ） 或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn) ， 然而 ， 鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究 是否可使用這些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn) 。 　　GB/T 6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法 3原理 　　樣品中殘留的孔雀石綠經(jīng)過二氯甲烷提取后用硼氫化鉀還原為其相應(yīng)的代謝產(chǎn)物 ， 固相萃取柱凈化 后 ， 反相色譜柱分離 ， 熒光檢測器檢測 ， 外標(biāo)法定量 。 4試劑 　　除另有規(guī)定外 ， 所有試劑均為分析純 ， 試驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T 6682一級水的標(biāo)準(zhǔn) 。 4. 1乙腈：色譜純。 4.2二氯甲烷。 4. 3冰乙酸。 4.4氨水。 4.5孔雀石綠：純度X98%. 4.6提取液：鹽酸羥胺3g ， 對甲苯磺酸0.24g溶于100 mL水中。 4. 7硼氫化鉀溶液［0.2 %]：稱取0. 2g硼氫化鉀溶于100 ML水中 ， 現(xiàn)配現(xiàn)用 。 4.8乙酸銨緩沖溶液［0. 125 mol/L]：稱取9.64 g無水乙酸銨溶解于1 000 ML水中 ， 用冰乙酸調(diào)pH 至4.5， 過0.45 μ 皿濾膜備用 。 4.9乙酸銨緩沖溶液［0. 1 mol/L]：稱僅7. 71 g無水乙酸銨溶解于1 000 ML水3， 用氨水調(diào)pH到10.0, 過0.45 μ m 濾膜備用 。 4.10 PRS柱洗脫液：乙酸銨緩沖溶液 （ 4.9)＋乙U=1+1， 現(xiàn)配現(xiàn)用 。 4.11陽離子交換柱：Varian PRS柱或者相當(dāng)者 ， 500 mg, 3 mL ， 使用前用5 mL乙腈活化 。 4.12標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液［100 μ g/mL]：準(zhǔn)確稱取孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)品 ， 用乙腈配制成100 leg/ML的標(biāo)準(zhǔn)貯備液 ， -18℃避光保存． 4.13標(biāo)準(zhǔn)中間液［1 Pg/mL]：吸取孔雀石綠的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液 （ 4. 12)1.00 mL至100 mL容量瓶 ， 用乙 腈稀釋至刻度 ， 一18℃避光保存 。 4.14標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：吸取一定量的孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)中間液 （ 4. 13)， 加入硼氫化鉀溶液 （ 4.7) 0.40 mL ， 用 乙Ph稀釋至2.00 mL ， 配制成適當(dāng)濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液 ， 現(xiàn)配現(xiàn)用 。 5儀器 5. 1高效液相色譜儀：配熒光檢測器 。 [第4頁] DB44/T 570一一2008 5.2振搖器或搖床。 5.3旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。 5.4固相萃取裝置。 6色譜條件 6. 1色譜柱：C18柱， 250 mm X 4.6 mm （ 內(nèi)徑） 粒度5 Pm ：或與之相當(dāng)?shù)纳V柱。 6.2流動(dòng)相：乙腈十乙酸銨緩沖溶液（ 0. 125 mol/L, pH4.5) =80+20. 6.3色譜柱溫：38 C. 6.4流速：1.5 mL/min. 6.5激發(fā)波長：265 rim. 6.6發(fā)射波長：360 nm. 6. 7進(jìn)樣最：50 YL. 7測定步驟 7. 1提取 　 　先將 水樣用0.45 Pm 膜 過濾 ， 除去 固體雜 質(zhì) 。 準(zhǔn) 確移取20 mL水樣 于100 mL分 液漏斗 ， 加入2 mL提取 液 （ 4. 6) , 20 mL二氯甲烷 ， 震搖5 min ， 靜置 ， 將二氯甲烷層移至100 mL的梨形瓶 。 向分液漏斗加入2 mL提取液 （ 4.6） 和20 mL二氯甲烷重復(fù)上述步驟一次 ， 靜置分層后 ， 將二氯甲烷層并入同一梨形瓶 ， 于 30℃條件下減壓hK發(fā)至近干 。 7. 2凈化 　 　 將PRS柱 子 接 到 固 相 萃 取 裝 置 上 ， 先 用5 mL的 乙 腈 分 兩 次 活 化 柱 ， 然 后 用2 mL乙MY]洗 滌 梨 形 瓶 ， 洗 液 加 入1 mL硼 氫 化 鉀 （ 4.7)， 輕 輕 振 搖 ， 過 柱 ， 再 加 入2 mL的 乙P"洗 滌 梨 形 瓶 ， 過 柱 ， 將PRS柱 抽 至 近 干 ， 用3 mL PRS柱洗脫液 （ 4.10） 洗脫 ， 接收于5 mL刻度管中定容至3 mL ， 過0.45 pm 濾膜 ， 供液相色譜備 用 。 7. 3色譜分析 　　分別注入50 μ L孔雀石綠的標(biāo)準(zhǔn)工作液及樣品提取液于液相色譜儀中 ， 按上述色譜條件進(jìn)行色譜分 析 ， 記錄峰面積 ， 響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍之內(nèi) ， 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間定性 ， 外標(biāo)法定量 。 標(biāo)準(zhǔn)色譜圖參見附錄A中圖A. 1. 7.4空白試驗(yàn) 　　除不加試樣外 ， 均按上述測定步驟進(jìn)行 。 8計(jì)算 　　樣品中孔雀石綠的殘留量按式 （ l） 計(jì)算 。 　 　 　 　 　 X ＝＝ AxC, xTX - x 1000 ................................................... (1) 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 月 s＞＜ ％ 式 中 ： X -—樣 品 中 待 測 組 分 殘 留 量 ， 單 位 為 微 克 每 升 （ Pg/L) Cs -—待 測 組 分 標(biāo) 準(zhǔn) 工 作 液 的 濃 度 ， 單 位 為 微 克 每 毫 升 （ μ g/ML) : 彳 — — 樣 品 中 待 測 組 分 的 峰 面 積 ； As-—待 測 組 分 標(biāo) 準(zhǔn) 工 作 液 的 峰 面 積 ； F一 一 樣 液 最 終 定 容 體 積 ， 單 位 為 毫 升 （ mL) : vo-—樣 品 體 積 ， 單 位 為 毫 升 （ mL) . 注 ： 計(jì) 算 結(jié) 果 需 扣 除 空 白 值 。 [第5頁] DB44/T 570-2008 9線性范圍 　　孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)溶液的線性范圍：0.0005 μ g/mL^-0.8 μ g/mL. 10方法檢測限 　　本方法的檢測限為0.2 ug/L. 11相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 　　本標(biāo)準(zhǔn)的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差＜15%. 12方法回收率 　　本方法的回收率>, 70 %a [第6頁] DB44/T 570一一2008 　　　　附錄A 　 　 　 （ 資 料 性 附 錄 ） 孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)的液相圖譜 w — — 一 — — 一 一 一 一 — — 一 一 — — — — ， 一 — — 一 — — 0 2 4 0 8 1c 圖A. 1孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)的液相圖譜