第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)990240第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)資源系統(tǒng) JOURNAL OF THE FOURTH數(shù)字化期刊 WANFANG DATA (CHINAINFO) MILITARY MEDICAL UNIV ERSITY DIGITIZED PERIODICAL1999年第20卷第2期Vol.20No.21999聚乙二醇對人源ABO定型血清效價(jià)的影響楊世明楊棖林關(guān)鍵詞:聚乙稀二醇類;定型血清ABO血型系統(tǒng);效價(jià)中圖號:R457.11文獻(xiàn)標(biāo)識碼:B0引言實(shí)驗(yàn)觀察與應(yīng)用表明聚乙二醇(PEG)能增強(qiáng)酶法配血和間接抗人球蛋白試驗(yàn)的敏感性,縮短了配血試驗(yàn)和不完全抗體的檢測時(shí)間[1.為了解PEG能否提高人源ABO定型血清的效價(jià),我們用PEG濃縮人源ABO定型血清對PEG不同分子量、不同濃度、不同濃縮時(shí)間和溫度對血清效價(jià)的影響以及濃縮后不同層次的血清效價(jià)進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)比較和應(yīng)用1材料和方法1.1試劑與器材PEG試劑,日本進(jìn)口天津天秦精細(xì)化學(xué)品有限公司分裝批號930109.pH7.0磷酸鹽緩沖液(PBS),9g/L生理鹽水單抗血清扭力天平離心沉淀器低溫離心機(jī)水浴箱玻璃試管和瓶子等1.2實(shí)驗(yàn)與應(yīng)用方法收集獻(xiàn)血員化驗(yàn)檢查肝功合格的標(biāo)本血清置4℃冰箱48h吸收冷凝集素離心分離血清置56℃水浴箱30min活用50m/新鮮紅細(xì)胞懸液測定原血清基礎(chǔ)效價(jià).上述血清加入等量PEG溶液,混勻放15min~60min,3000r/min離心10min~30min棄去上清液沉淀物按100g/L加入生理鹽水稀釋再測定濃縮后的血清效價(jià)、親和力和特異性,合格后置-20℃冰箱保存;將因故不輸?shù)难菏占蜏仉x心30min,分離血清置56℃水浴1h以3000r/min離心30min,分離上層血清測定其效價(jià)、親和力和特異性后按上述方法濃縮.1.3結(jié)果判定測定PEG濃縮前、后血清效價(jià)、親和力和特異性所有試驗(yàn)重復(fù)3次測定10份標(biāo)本濃縮后血清效價(jià)均增高2個(gè)滴度和積分均增加13以上判為效價(jià)提高.2結(jié)果2.1不同PEG分子量對血清效價(jià)的影響將種不同分子量的PEG粉劑均按200mL/濃度配制加入等量血清攪拌濃縮分離血清測定效價(jià)結(jié)果顯示PEG6千提高血清效價(jià)的效果非常明顯,PG-1萬和PEG-2萬效果較差(表1)2.2Peg濃度對血清效價(jià)的影響用PBS將PEG-6千粉劑分別配成200g/,150g/L和100g/L的濃度,用不同濃度的PEG溶液濃縮抗A血清結(jié)果表明150mL/L的PEG濃度提高血清效價(jià)的效果最好(表2)第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)990240表1不同PEG分子量濃縮前/后效價(jià)的比較PEG分子量效價(jià)積分親和力/s2萬32/3237/37>30/>301萬32/3237/37>30/>300.6萬32/12837/85>30/<15表2不同PEG濃度濃縮前/后效價(jià)的比較PEG濃度/ml'L-1效價(jià)積分親和力/s20032/6437/59>30/>2015032/51237/95>30/<1010032/3237/47>30/>252.3不同層次血清效價(jià)的比較將150溶液與血清等量混勻30min后,3000r/min離心30min,測定不同層次的血清效價(jià)結(jié)果沉淀物效價(jià)為512積分95親和力<10明顯高于1/2和下1/3層的血清效價(jià)(表3).表3PEG濃縮后不同層次血清效價(jià)的比較血清層次效價(jià)積分親和力/s1/24813>30下1/323>25沉淀物51295<102.4濃縮時(shí)間對血清效價(jià)的影響將PE溶液與血清混勻分別濃縮15min,30min和60min,結(jié)果15min,30min效價(jià)均為256積分83,60min效價(jià)為512積分95.2.5不同濃縮溫度對血清效價(jià)的影響將PEG溶液與血清混勻后分別置4C,22℃和37℃濃縮,結(jié)果4C效價(jià)512積分95,22C效價(jià)256積分83,37效價(jià)128積分71.2.6血清抗體特異性測定將濃縮后的定型血清分別與A型、B型、O型和AB型各10名獻(xiàn)血員紅細(xì)胞作凝集試驗(yàn)證實(shí)特異性合格.3討論高質(zhì)量的ABO定型血清是正確鑒定血型確保輸血安全的前提近年來發(fā)達(dá)國家已有用單抗血清取代人源ABO定型血清的趨勢但國內(nèi)該工作起步較晚且單抗血清還存在著因其特異性強(qiáng)而只能判別一個(gè)抗原決定族可能會(huì)使一些A、B亞型漏檢因其濃度高就有大得多的機(jī)會(huì)與另一些非特異性分子發(fā)生假陽性反應(yīng)[2]以及單抗血清本身也易被細(xì)菌污染而造成血型誤定等缺點(diǎn)[31,目前還不能完全取代人源ABO定型血清因此對人源ABO尤其是稀有定型血清進(jìn)行最適制備、保存和提高其效價(jià)的方法學(xué)研究仍有重要意義.我們研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)PEG-6千及其150g/L濃度提高血清效價(jià)的效果最明顯PEG提高人源ABO定型血清效價(jià)可能與血清抗體是免疫球蛋白PEG是線形大分子物第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)990240質(zhì),具有極強(qiáng)的親水性加入反應(yīng)體系后經(jīng)離心力的作用致使血清蛋白濃縮和沉淀[4],從而顯著提高血清效價(jià).我們先后收集A,B型血清各800mL(效價(jià)32)用此方法濃縮后血清效價(jià)均提高到256~512積分83~95親和力s~12s出現(xiàn)凝集,3min時(shí)凝塊大于1.5mm2經(jīng)與傳統(tǒng)方法制備的ABO定型血清和單抗血清進(jìn)行8000余人次的試驗(yàn)比較同時(shí)用PEG溶液作陰性對照結(jié)果符合率為100%用PEG濃縮法提高人源ABO定型血清效價(jià)方法簡便效果明顯,不需特殊儀器設(shè)備PEG容易購買毒性低長期貯存不變質(zhì)此法具有廢物利用節(jié)約血液資源降低成本費(fèi)用提高經(jīng)濟(jì)效益等優(yōu)點(diǎn).作者簡介:楊世明,男,43歲,主管技師作者單位:楊世明楊棖林第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院輸血科陜西西安710038參考文獻(xiàn)1楊世明楊棖林洪炳炎聚乙二醇快速檢測不完全抗體及其應(yīng)用第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),199516(1):74-752李振才紅細(xì)胞血型及血型診斷試劑研究進(jìn)展見:全軍輸血專業(yè)管理委員會(huì)編.輸血與輸血相關(guān)領(lǐng)域研究進(jìn)展.北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社,1996:17-203方志明沈光趙桂珍.超濃縮法制備人源抗血清定型試劑的質(zhì)量觀察中國輸血雜志,19958(3):131-1324桂勇陳宏礎(chǔ)黃天祿.用PEG分離血清高密度脂蛋白膽固醇及其亞組份的方法學(xué)探討臨床檢驗(yàn)雜志,19875(4):170-172編輯王小仲收稿日期:1998-02-17;修回日期:1998-06-15