農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào)2014,4(1):90Journal of Agriculturewww.caa].org海頭紅乙醇提取物的化學(xué)成分分析林勇',歐陽(yáng)桐嬌2,張迪',王宏雨',毛方華(福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所,福州350003:福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)究所,福州350003)摘要:研究紅藻海頭紅( Plocamium telfairiae harⅳ)的化學(xué)成分,分析其抗菌活性來(lái)源。通過(guò)硅膠柱色譜、 Sephadex Lh-20凝膠柱色譜和薄層色譜對(duì)海頭紅乙醇提取物的抗菌成分進(jìn)行活性追蹤分離,并通過(guò)質(zhì)譜和波普數(shù)據(jù)分析鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。在分離過(guò)程中得到4種化合物,通過(guò)GCMS、HM和"C-NMR對(duì)化合物進(jìn)行分析鑒定,經(jīng)鑒定4種化合物分別為十六烷酸、十八烷酸、對(duì)羥基苯甲酸、鄰苯二甲酸二辛脂,對(duì)羥基苯甲酸為海頭紅乙醇提取物中的一種抗菌化合物。關(guān)鍵詞:海頭紅;乙醇提取物;化學(xué)成分中圖分類號(hào)R2842文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A論文編號(hào):2013-0599Studies on the Chemical Compounds of the Ethanol Extract of Plocamium telfairiae Harv.Lin yong, Ouyang Tongjia, Zhang Di, Wang Hongy(institute of Edible Fungi, Fujian Academy of Agricultural Science, Fuzhou 350003, Fujian ChinaBiotechnology Institute, Fujian Academy of Agricultural Science, Fuzhou 350003, Fujian China)Abstract: To study the chemical constituents and antimicrobial compounds of Plocamium telfairiae Harv, thesilica gel column, SephadexLH-20 column and thin layer chromatographic techniques were applied to separateand purify the compounds. structures of compounds were confirmed by the data of mass spectrum and spectral.Four compounds were isolated from the ethanol extract of Plocamium telfainiae Harv. Then these compoundswere identified by GC-MS, H-NMR and C-NMR spectral analysis. Four compounds were identified asn-hexadecanoic acid, octadecanoic acid, 4-hydroxybenzoic acid, dioctyl phthalate. The 4-hydroxybenzoic acidwas an antimicrobial compounds from ethanol extract of Plocamium telfainiae HarvKey words: Plocamium telfairiae Harv. Ethanol Extract; Chemical Compounds0引言頭紅抗腫瘤成分進(jìn)行了研究,報(bào)道了膽甾醇、3-B-乙海頭紅( Plocamium telfairiae hary)為紅藻門杉藻酰氧基膽甾-5-烯-7-酮、膽甾醇-十八烷酸酯等6個(gè)化合目海頭紅科海頭紅屬海藻,生長(zhǎng)在低潮帶巖灘上,主要物。課題組前期對(duì)海頭紅提取物的抗菌活性進(jìn)行了分布于太平洋西海岸。國(guó)內(nèi)外對(duì)海頭紅屬的多種海藻研究發(fā)現(xiàn)海頭紅的乙醇提取物對(duì)食用菌生產(chǎn)中的競(jìng)的化學(xué)成分進(jìn)行了研究,結(jié)果表明海頭紅屬的許多海爭(zhēng)性雜菌具有較好的抑制活性,但是對(duì)其具體抗菌藻含有多種鹵代單萜以。但關(guān)于海頭紅屬中的海頭紅活性的來(lái)源還不清楚,而且有關(guān)海頭紅中抗菌化學(xué)成種的化學(xué)成分研究的報(bào)道較少見(jiàn),僅國(guó)內(nèi)少數(shù)學(xué)者對(duì)分的研究目前還處于空白的狀態(tài)。因此,筆者嘗試對(duì)其進(jìn)行了研究。苑輝卿等對(duì)青島沿海的海頭紅的成分海頭紅乙醇提取物中的抗菌成分進(jìn)行進(jìn)一步的追蹤分進(jìn)行了分析,鑒定了三十四烷、四十三烷、β谷甾醇、對(duì)離,通過(guò)分離出其中的主要抗菌成分,繼而明確其抗菌羥基苯甲醛、尿嘧啶等10個(gè)化合物艸,張翼等人對(duì)?；钚缘膩?lái)源,從而為相關(guān)抑菌機(jī)理的研究和應(yīng)用提供基金項(xiàng)目:福建省自然科學(xué)基金計(jì)劃資助項(xiàng)日“海頭紅提取物對(duì)食用菌病害菌抑制作用的研究”(2010J01100第一作者簡(jiǎn)介:林勇,男,1971年出生,福建平潭人,副研究員,碩士,主要從事食用菌天然產(chǎn)物研究。通信地址:350003福建省福州市五四路247號(hào)福建省農(nóng)科院創(chuàng)新大樓1215室,rel:0591-87869480, E-mail: Foresty@163com通訊作者:歐陽(yáng)桐嬌,女,1963年出生,福建福州人,副研究員,本科,主要從事生物技術(shù)和天然產(chǎn)物研究。通信地址:350003福建省福州市五四路247號(hào)福建省農(nóng)科院創(chuàng)新大樓1215室,Tel:059157869480,Emil: foresty@126om收稿日期:20130809,修回日期:2013-10-09Www。 caa.orgJ◇A農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào)參考。PeE1~PeEl共11個(gè)級(jí)分;PeE2~PeE6部分繼續(xù)通過(guò)硅1材料與方法膠層析以氯仿-甲醇[(15~3):門進(jìn)行梯度洗脫,得到11儀器與材料PeEL~PeEC32共32個(gè)級(jí)份,PeEC5~PeEC7得到有抗11.1提取材料海頭紅采集于福建石獅市永寧鎮(zhèn)海岸菌活性的油狀部分D,PeEC9 PeSCI2級(jí)分上巖灘,回后用清水洗去藻體表面雜質(zhì)再次用蒸餾水 Sephadex lh-20層析柱進(jìn)一步純化,以氯仿:甲醇=1:1洗凈,然后放置于室內(nèi)陰干備用。洗脫得到12個(gè)流動(dòng)分,其中級(jí)份3-4通過(guò)丙酮反復(fù)重112試劑 Sephadex LH-20( Pharmacia公司);柱層析結(jié)晶得到針狀結(jié)晶化合物3約15mg用200-300目硅膠(國(guó)藥試劑集團(tuán)有限公司);GF254薄1.23海頭紅化學(xué)成分的儀器分析GCMS儀系安捷層層析硅膠板(青島海洋化工廠);其他常規(guī)藥品、試劑倫68905973n色質(zhì)聯(lián)用儀,色譜柱DB-5ms毛細(xì)管為國(guó)產(chǎn)分析純。柱。氣相色譜條件:進(jìn)樣口溫度:250℃;分流比501;1.3儀器安捷倫68905973n色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(英國(guó)升溫程序:100℃(5mn)→5℃/mn→280℃(5min)質(zhì)譜安捷倫公司); AVANCEⅢ500核磁共振儀(瑞士條件:離子源E:電離電壓70eV:;掃描范圍:50Bruker)。500amu。核磁共振波普分析采用 Bruker的 AVANCE121海頭紅提取物的制備將已經(jīng)陰干的海頭紅,于表示,以TMS作為內(nèi)標(biāo),偶合常數(shù)(用H表PD1.2試驗(yàn)方法ⅢI500型核磁共振儀頻率500MHz,位移值(δ用ppm45℃下烘干24h后用高速萬(wàn)能粉碎機(jī)粉碎成粉末。取2分析鑒定海頭紅藻粉2kg,用3倍體積量的95%乙醇浸提22.化合物次,每次浸提3天。將提取液過(guò)濾、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃白色細(xì)鱗片狀粉末,HNMR(CDCl,500MHz)縮后析出大量無(wú)機(jī)鹽,過(guò)濾取濾液繼續(xù)濃縮得到黑褐088(3H,t-6.5Hz),1,2(24H,m),1.502H,m),2.28色浸膏60.25g,占藻粉總重的24%。(2H,t,J70Hz);"C-NMR(CDCl,125MHz)6180.34,12.2海頭紅提取物的分離將海頭紅提取物浸膏以34.18,31:82,29,57,29.39,29.34,29.26,29:08,27.35,70%甲醇溶解分散,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃24.70,2270,14.05;GCMS:T-996mim,Area=100%,取,石油醚萃取完后先用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸掉甲醇再用氯Qua}98(n- hexadecanoic acid); EI-MS m/z.256M仿和乙酸乙酯進(jìn)行萃取,每種溶劑萃取3次。將萃取241,239,227。通過(guò)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)檢索以及與相關(guān)文獻(xiàn)收集的各部分溶劑用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干獲得各萃取部的核磁數(shù)據(jù)對(duì)比,該化合物數(shù)據(jù)與十六烷酸信息一分,分別得到石油醚萃取部分25.88.7%)氯仿萃取致,故確定化合物1為十六烷酸部分175g(0.7%)乙酸乙酯萃取部分9.1g(0.36%)。22化合物2石油醚萃取部分通過(guò)硅膠柱層析,以石油醚-乙酸白色粉末, H-NMR(CDCI2,500MHz)6:0.88(3H,乙酯[(20-1)梯度洗脫,最后以乙酸乙酯清柱,獲得t}6.5H),1.26(28H,m,1.58(H,m),2.30(2H,t,PE1PEl1共11個(gè)級(jí)分,PE2級(jí)份以正己烷二氯甲烷:7.5H);CNMR(CDCl,125MHz)6:180.21,34.08,甲醇=3:3:1為洗脫劑在 Sephadex-20凝膠柱上進(jìn)3190,2975,29662964、29.59,2945.29.38.2926步純化得到白色鱗狀化合物1約200mg24.70,22.70,14.08;GC-MS:Tr=1282min,Area98%,氯仿萃取部分部分進(jìn)行減壓硅膠柱層析,200Qma99( Octadecanoic acid);EMsm:284M;,300目硅膠,干法上樣,氯仿萃取相以石油醚丙酮[(20:1)2356,241,213,199。通過(guò)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)檢索以及于相關(guān)(1:10)進(jìn)行梯度洗脫,以丙酮清柱,獲得PeAl-PeAl3文獻(xiàn)的核磁數(shù)據(jù)對(duì)比,該化合物數(shù)據(jù)與十八烷酸信共13個(gè)級(jí)份。PeAl-PeA2級(jí)分以正己烷:二氯甲烷:甲息一致,故確定化合物2為十八烷酸醇=3:3:1為洗脫劑在 Sephadex20層析柱上進(jìn)一步23化合物3純化得到白色粉末狀化合物2約10mg:PeA5PeA7級(jí)白色針狀結(jié)晶,HNMR( CD, COCD2,500MHz)分繼續(xù)通過(guò)硅減壓膠柱層析以氯仿-甲醇(15~5):1]梯8:6.93(2H,d,盧8.5Hz,793(2H,d,8.5Hz);度洗脫,獲得 PeALl-PeAL24共24個(gè)流份,通過(guò) C-NMR(CD, COCD,125MH)6:15.73,122.49,GF254硅膠板薄層層析檢測(cè)合并相同部分,132.51,162.38,167.16;GCMS:Tr4lmin,ArcaPeAL3~PeAL4級(jí)分得到油狀化合物4約80mg95%, QuaA59(Benzoic acid, 4-methoxy-); EI-MS m/z乙酸乙酯萃取部分通過(guò)硅膠柱層析,以石油醚-乙138M,121,93。將核磁數(shù)據(jù)和質(zhì)譜信息與相關(guān)文獻(xiàn)酸乙酯(5:1-1:5進(jìn)行梯度洗脫,以乙酸乙酯清柱,獲得的對(duì)比,該化合物數(shù)據(jù)與對(duì)苯羥基苯甲酸的數(shù)據(jù)基本林勇等:海頭紅乙醇提取物的化學(xué)成分分析致,故確定化合物3為對(duì)羥基苯甲酸中活性成分的含量一般比較低,而傳統(tǒng)檢測(cè)方法大多(p-hydroxybenzoic acid)需消耗較多樣品,這就導(dǎo)致在追蹤分離過(guò)程中常常發(fā)24化合物4生未分到目標(biāo)化合物樣品就已消耗殆盡的情況。筆者淡黃色油狀液體,HNMR(CDCl,500MHz)6:在研究過(guò)程中也犯了同樣的錯(cuò)誤,導(dǎo)致許多活性級(jí)分093(12H,m),1,42(16H,m),1.6l(2H,m),4.12(4H,d,的丟失,僅少數(shù)含量較高的成分能完成純化鑒定。因110H,52Hz),7.52(2H,dd,J6.0Hz,30Hz),7.9而,為了提高活性成分追蹤分離的效率和全面性,有必(2H,d,6.0Hz,3.0Hz);"CNMR(CDCl2,125MHz)要改進(jìn)活性跟蹤的檢測(cè)方法,.用諸如TLC生物自顯6:16718,132.58,1309,12864,680,3867,30.16,影技術(shù)酶標(biāo)儀濁度法等新型的微量檢測(cè)手段,對(duì)2862,2404,22.96,1442,10.65;GCMS:Tr=192min,海頭紅乙醇提取物再進(jìn)行系統(tǒng)性的分離、分析Area=93%, QuaH90(1, 2-Benzenedicarboxylic acid, Bis試驗(yàn)過(guò)程中還從海頭紅的乙醇提取物中分離到了(2 ethylhexyl) ester,EMSm么279,251,167,149。鄰苯二甲酸二辛酯,鄰苯二甲酸二辛酯目前多用作塑通過(guò)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)檢索以及于相關(guān)文獻(xiàn)的核磁數(shù)據(jù)對(duì)料增塑劑,在各種醫(yī)療用品中廣泛使用。因而,其有可比12,該化合物數(shù)據(jù)與鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯能源自試驗(yàn)操作過(guò)程中的容器污染。張翼等對(duì)海頭信息一致,故確定化合物為鄰苯二甲酸二(2-乙基己紅的脂溶性成分的研究中也發(fā)現(xiàn)了鄰苯二甲酸二辛脂基)酯,又名鄰苯二甲酸二辛脂。和其他鄰苯二甲酸脂類,它們的含量在檢測(cè)樣品中達(dá)3討論到了5042%,含量之高遠(yuǎn)超出外源污染合理值,因而筆者首次對(duì)海頭紅乙醇提取物中的抗菌成分進(jìn)推測(cè)鄰苯二甲酸脂類亦有可能是海頭紅本身的次生代行了追蹤分離,并對(duì)追蹤分離過(guò)程中獲得的幾種化合謝產(chǎn)物,有待進(jìn)一步研究確認(rèn)。物并進(jìn)行了分析鑒定。在研究過(guò)程中,從乙酸乙酯萃取相中分離到了具有抗菌活性的油狀級(jí)分D和對(duì)羥基參考文獻(xiàn)苯甲酸。通過(guò)對(duì)D級(jí)分進(jìn)行GCMS分析發(fā)現(xiàn)其中的1] Diaz-Marrero A r, Rovirosa j, Arias j,etal. Plocamenols A-C抗菌成分為對(duì)羥基苯甲醛,但由于D級(jí)分樣品數(shù)量有novel linear polyhalohydroxylated monoterpenes from Plocamium限,筆者未對(duì)D級(jí)分進(jìn)行進(jìn)一步的分離,苑輝卿等在cartilagineum[]. Joumal of Natural Products, 2002, 65: 585-588對(duì)海頭紅化學(xué)成分研究過(guò)程中分離也到了對(duì)羥基苯甲2] Jongaramruong, Blackman AJ. Polyhalogenated monoterpenesfrom a Tasmanian collection of the red seaweed plocamium醛。另外一個(gè)抑菌成分對(duì)羥基苯甲酸與對(duì)羥基苯甲醛cartilagineumJ] Joumal of Natural Products, 2000,63: 272-275是類似物,其可由對(duì)羥基苯甲醛氧化產(chǎn)生。由此可見(jiàn),[3] Rezanka Tomas, Dembitsky Valery M. Polyhalogenated海頭紅藻體內(nèi)這些酚類物質(zhì)的含量是較高的,其有可homosesquiterpenic fatty acids from Plocamium cartilagineumJ]能是海頭紅乙醇提取物抗菌活性的主要來(lái)源。Phytochemistry, 2001, 57: 607-611對(duì)羥基苯甲酸的脂類衍生物又稱為尼泊金脂,是苑輝時(shí)巖鵬曲顯俊等紅藻海頭紅藥效學(xué)及化學(xué)成分的研究1[中國(guó)海洋藥物2000195):7-l類低毒、高效、用量少抑菌譜和pH適用范圍廣的優(yōu)1苑輝卿閻明濤書興光等紅藻海頭紅化學(xué)成分的研究中國(guó)良抗菌防腐劑,其中的對(duì)羥基苯甲酸甲酯及其鈉鹽藥學(xué)雜志2001,36(12)806808和對(duì)羥基苯甲酸乙酯及其鈉鹽在GB2760中列為可在(6張翼海藻抑制乙酰膽堿酯酶活性及紅藻海頭紅化學(xué)成分的研究直接攝入食品中應(yīng)用的防腐劑嗎。目前的研究表明[D]青島:中國(guó)科學(xué)院海洋研究所2004對(duì)羥基苯甲酸脂類的抑菌力和抑菌譜特性可以由其碳7]歐陽(yáng)桐嬌,鄭怡劉艷如等海頭紅提取物抑制食用菌競(jìng)爭(zhēng)性雜菌鏈長(zhǎng)度進(jìn)行調(diào)整,同時(shí)有些對(duì)羥基苯甲酸脂類例如的研究[江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2007,19(19):105-107[8] Anwer M Suhail, Mohtasheem M, Azhar Iqbal, et al. Chemical對(duì)羥基苯甲酸殼聚糖脂還具有較好的高溫穩(wěn)定性",Constituents from Melilotus officinalis]. Journal of Basic and因而其對(duì)食用菌栽培料中雜菌的防治具有一定的應(yīng)用Applied Sciences, 2008, 4(2): 89-94前景。目前為止,未見(jiàn)有對(duì)羥基苯甲酸脂類在該領(lǐng)域[9]姜北趙勤實(shí)林中文等三花槍刀藥化學(xué)成分研究[天然產(chǎn)物研應(yīng)用的研究報(bào)道,有待進(jìn)一步開(kāi)展相關(guān)復(fù)配抗菌劑的究與開(kāi)發(fā)1996,13(6:12-15研究[10] Muhammad S A, Muhammad S, Farzana A. Three p-cymene筆者在海頭紅乙醇提取物的抗菌成分的活性追derivativeZataria multiora] Phytochemistry, 1999, 52: 68511] Giang P M, Son P T, Matsunami K, et aL. New megastigmane蹤過(guò)程中,對(duì)一些抗菌級(jí)分的抑菌活性進(jìn)行了檢測(cè),相glucosides from Excoecaria cochinchinensis Lour. var.關(guān)內(nèi)容另文報(bào)道。在對(duì)天然抗菌成分的分離鑒定研究cochinchinensis[]. Chem Pharm Bull, 2005, 12: 1600-1603中,分離物的活性的檢測(cè)是必不可少的環(huán)節(jié),天然產(chǎn)物[2J唐麗李國(guó)玉楊柄友等廣棗化學(xué)成分的研究門中草藥20040www.caa.orgJ農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào)93(4):541-543[16]趙希榮夏文水對(duì)羥基苯甲酸殼聚糖酯的抑菌活性研究[食品[13] Lu X H, Zhang JJ, Liang H Chemical constituents of Angelica科學(xué)2007,28(2)78-83sinensis. Joumal of Chinese Pharmaceutical Sciences,2004,13(1):[17曲建博姿紅祥范培紅TC生物自顯影技術(shù)在藥物篩選中的應(yīng)用中草藥2005,36(132-137[l4]楊壽清鮑福根對(duì)羥基苯甲酸酯衍生物的使用安全性和復(fù)配效果[18]宮霞樂(lè)國(guó)偉李云飛家蠅幼蟲(chóng)抗菌肽的抗菌譜及其與抗生素的[冷飲與速凍食品工業(yè)2003,9(4:2629協(xié)同作用[門研究微生物學(xué)報(bào)200545(4):516-520[15]中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)GB2760-2007食品添加劑使用衛(wèi)[19張翼陳昌祥,李曉明等紅藻海頭紅脂溶性成分研究門中草藥,生標(biāo)準(zhǔn)S]北京:中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部2002006,37(11)1626-1627.(上接第32頁(yè))定程度的富集,但并不顯著;生長(zhǎng)年限對(duì)灌叢根際有(5]劉增文,李雅素黃土高原檸條林地土壤肥力與養(yǎng)分循環(huán)門生態(tài)效磷含量的影響并無(wú)明顯規(guī)律,0-5年小葉錦雞兒灌學(xué)報(bào),1997,16(6):27-29叢根際土的有效磷含量出現(xiàn)了虧缺,10~30年根際土6]蘇永中趙哈林張銅會(huì)幾種灌木、半灌木對(duì)沙地土壤肥力影響機(jī)的有效磷含量有明顯的富集作用速效鉀含量會(huì)隨著(馬子清山西植被北京中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版社200856生長(zhǎng)年限的增加出現(xiàn)消耗,且根際富集效應(yīng)明顯。[8]張強(qiáng)晉西北小葉錦雞兒( Caragana microphylla)人工灌叢營(yíng)養(yǎng)特土壤酶是存在于土壤中各酶類的總稱,是土壤的征與土壤肥力狀況研究[D]山西:山西大學(xué),201:17-24組成成分之一。土壤酶活性包括已積累于土壤中的酶9]阮建云,馬立鋒石元值茶樹(shù)根際土壤性質(zhì)及氮肥的影響茶葉活性,也包括正在增殖的微生物向土壤釋放的酶活科學(xué)200323(2)167-170性。它主要來(lái)源于土壤中動(dòng)物、植物根系和微生物的10]李慶逵土壤理化分析M]北京科學(xué)出版社1985:6-145.[ll嚴(yán)永生土壤肥力研究方法M北京農(nóng)業(yè)出版社998105-112細(xì)胞分泌物以及殘?bào)w的分解物,與土壤中發(fā)生的生物12]李博生態(tài)學(xué)DM北京:高等教育出版柱200640化學(xué)過(guò)程關(guān)系密切。本研究表明:隨著灌叢定植年[13]馬斌周志字,張彩萍等超旱生灌木根際土壤磷的含量特征口草限的延長(zhǎng),在5~30年變化過(guò)程中,土壤過(guò)氧化氫酶和業(yè)學(xué)報(bào)2005,16()1065-10堿性磷酸酶活性在5~-10年均處于快速增長(zhǎng)期、10-20014張學(xué)利楊樹(shù)軍劉亞萍,等章古臺(tái)固沙林主要樹(shù)種根際土壤性質(zhì)年處于緩慢提高期,20~30年處于緩慢降低期。研究門中國(guó)沙漠,2004(1):72-76[5]孟亞利,王立國(guó)周治國(guó)等套作棉根際與非根際土壤酶活性和養(yǎng)平茬是利用小葉錦雞兒萌蘗能力強(qiáng)的特性,利用分的變化門應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào),2005,16(112076-2080人力定期將地面上部枝條剪去,以促進(jìn)新的枝條萌[l6]張成娥陳小利林地砍伐開(kāi)墾對(duì)土壤酶活性及養(yǎng)分的影響生生圓2。因此,綜合考慮黃土高原植被的可持續(xù)性,建態(tài)學(xué)雜志1998,17(6):18-21議小葉錦雞兒灌叢林應(yīng)在30年時(shí)及時(shí)平茬利用。[17η滕曉慧曹成有富瑤不同年齡小葉錦雞兒固沙群落土壤酶活性及微生物生物量的變化門生態(tài)環(huán)境,2007,16(3:1030-1034[18]周道瑋錦雞兒屬植物分布研究J植物研究,1996,16(4):428-435.參考文獻(xiàn)[19]劉建新不同農(nóng)田土壤酶活性與土壤養(yǎng)分相關(guān)關(guān)系研究[門土壤通[]王孟本李洪建柴寶峰檸條的水分生理生態(tài)學(xué)特性門]植物生態(tài)報(bào),2004,35(4):523-525學(xué)報(bào)1996,20(6):494501[20]李生榮檸條平茬更新的生物量調(diào)查及綜合利用青海科技,[2]牛西午張強(qiáng)楊治平等檸條人工林對(duì)晉西北土壤理化性質(zhì)變化2007(5):12-13的影響研究門西北植物學(xué)報(bào)200323(4):628-632.[3]牛西午檸條生物學(xué)特性研究華北農(nóng)學(xué)報(bào)199813(4:122-12921]鄭士光賈黎明,龐琪偉等平茬對(duì)檸條林地根系數(shù)量和分布的影響門北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)2010,32(3)64694]王生芳何世玉檸條人工林地土壤肥力的評(píng)價(jià)門青海農(nóng)林科技,98(3):29-31