第26卷第5期食品與生物技術(shù)學報 Vol.26 No.52007年9月 Journal of Food Science and BiotechnologySep.2007文章編號:1673-1689(2007)05-0035-03乙二醇葡糖苷的分離純化盧炳環(huán)12,金征宇(1.江南大學食品學院,江蘇無錫2141222.江南大學食品科學與安全教育部重點實驗室,江蘇無錫214122)摘要:以葡萄糖和乙二醇為原料,以磷酸為催化劑制備了乙二醇葡糖苷。采用萃取的方法對乙二醇葡糖苷進行初步分離,再用G15交聯(lián)葡聚糖凝膠進行層析柱分離,以質(zhì)量分數(shù)0.2‰的迭氮化鈉溶液做流動相,體積流量為0.9mL/min,可使乙二醇與乙二醇葡糖苷完全分離,實現(xiàn)除去乙二醇的目的。關(guān)鍵詞:葡糖苷;乙二醇葡糖苷;分離純化凝膠過濾;高效液相色譜中圖分類號:O629.13文獻標識碼:A The Separation and Purification of the Glycol Glucosides LU Bing-huan 12, JIN Zheng-yu' (1. School of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China; 2. Key Laboratory of Food Science and Safety, Ministry of Education, Jiangnan University Wuxi 214122, China) Abstract: Glycol glucosides were synthesized from glucose and glycol catalyzed by phosphorous acid. The primary separation to eliminate the glycol from glycol glucosides was carried out by extraction method with butyl alcohol. The purification eliminated glycol by gel filtration chromatography with G15 sephadex column The mobile phase was 0. 002% NaNa3 water solution. The velocity of flow is 0. 9 mL/min The methods could completely eliminate the glycol from glycol glucosides products. Key words: glucosides; glycol glucosides; separation; GFC;HPLC以乙二醇和葡萄糖為原料,以磷酸作催化劑可二醇的高沸點和乙二醇葡糖苷的高粘性,在減壓蒸合成乙二醇葡糖苷乙二醇葡糖苷具有良好的保餾的過程中,隨著乙二醇的不斷分離,乙二醇和乙濕性能,并且可以作為中間體合成生物可降解表二醇葡糖苷形成的均一體系的沸點不斷升高,因而面活性劑2,如多元醇脂肪酸酯。有報道說用此類分離過程也變得越來越困難。后來又通過萃取多羥基化合物與高級脂肪酸進行酯化反應,合成易的方法除去乙二醇,效果雖然比減壓蒸餾要好,便生物降解的表面活性劑長期以來,對乙二醇的仍不能實現(xiàn)完全分離。因此會給以后的化學反應制備和保濕性研究比較多,但很難得到純的乙二醇比如合成多元醇脂肪酸脂產(chǎn)生影響,為此,嘗試通葡糖苷目前提純乙二醇葡糖苷的方法大多是通過柱層析分離的方法的對乙二醇葡糖苷進行分離過減壓蒸餾除去反應體系中的乙二醇,但由于乙純化。收稿日期:2006-08-22.基金項目:國家“十五”科技攻關(guān)項目(2001BA804A23-04).作者簡介:盧炳環(huán)(1981-),女,山東濱州人,工學碩士通訊作者:金征字(1960-),男,江蘇揚州人,教授,工學博士,導,主要從事碳水化合物研究 Email: zjinjiangnan educn36食品與生物技術(shù)學報第26卷1儀器與試劑3結(jié)果與討論1.1儀器3.1乙二醇葡糖苷的萃取分離hl-2B型數(shù)顯恒流泵,DBS-100電腦全自動部萃取劑的量對乙二醇葡糖苷萃取效果的影響份收集器,RE52-3型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,SHZ3循環(huán)水見表1多用真空泵:上海滬西分析儀器廠產(chǎn)品。高效液相從表1中可以看出:隨著正丁醇用量的增加,色譜儀:安捷倫公司產(chǎn)品。樣品殘余的乙二醇含量越來越少,只有正丁醇做萃1.2試劑取能除去最大量的乙二醇,但乙二醇葡糖苷不能溶迭氮化鈉溶液質(zhì)量分數(shù)0.2‰;G15葡聚糖凝解于正丁醇,因此只有正丁醇做萃取劑進行萃取操膠,乙二醇葡萄糖苷粗品,乙腈:色譜純,江蘇漢陽作比較困難,因此采用V(丁醇):V(水)=4:1科技有限公司產(chǎn)品。的萃取劑進行萃取。表1萃取劑比例對乙二醇葡糖苷分效果的影響2實驗方法 Tab. 1 The effect of proportion of extractant on the separa-2.1乙二醇葡糖苷的制備與處理 tion of glycol glucosides將一定量的乙二醇加入裝有攪拌的四口燒瓶,V(正丁醇):V(水)殘余乙二醇質(zhì)量分數(shù)/%加入一定量的催化劑磷酸,抽真空,在2~3kPa下,1:151升溫至80℃左右,攪拌下加入適量的葡萄糖,快速2:145升溫至120~130℃,維持在此溫度下反應,并在減3:1394:131壓條件下除去反應生成的水,反應一定時間后,將4:025溫度降至80~90℃,得到透明的淺黃色粘稠液體,即為粗乙二醇葡糖苷。.2乙二醇和乙二醇葡糖苷的紫外掃描圖譜2.2乙二醇葡糖苷的初步分離純化乙二醇的紫外掃描圖譜見圖1,乙二醇葡糖苷備的粗乙二醇葡糖苷樣品用水溶解,中和的紫外掃描圖譜見圖2。至中性,通過減壓蒸餾,除去殘留的一部分乙二醇,0.10得到樣品1。在樣品1中加入一定比例的正丁醇和0.07水作為萃取劑,搖勻,對樣品進行萃取,然后真控干0.04燥(3。經(jīng)過初步分離純化的乙二醇葡糖苷用少許0.010.2‰的選氮化鈉溶液溶解,經(jīng)過0.45m的微孔濾膜過濾,上柱分離。-0.02L1903224545867188502.3乙二醇葡糖苷的純化/nm為得到純的乙二醇葡糖苷,使乙二醇與乙二醇圖1乙二醇的紫外掃描圖譜葡糖苷的完全分離,采用G15葡聚糖凝膠,利用兩 Fig. The UV scan of the glucol種試樣相對分子質(zhì)量不同,采用凝膠排阻色譜分離1.138的原理對樣品進行分離。用0.2的氮化鈉溶液0.886使層析柱平衡(經(jīng)過0.45m的微孔濾膜過濾),并0.635作為流動相,體積流量為0.9mL/min,每管收集1.8mL,上樣量為2mL,共收集90管。0.3842.4檢測0.132粗乙二醇葡糖苷經(jīng)過G15凝膠柱分離和自動-0.119部份收集后,間隔4管取一管進行HPLC分析。190252314376438500 A/nmHPLC分析采用氨基柱,V(乙腈):V(水)=75:25圖2乙二醇葡糖苷的紫外掃描圖譜做流動相,體積流量為1.0mL/min,采用示差折光 Fig.2 The UV scan of the glycol glucosides檢測器進行分析,檢測溫度為30℃。利用樣品分從上面的兩個紫外掃描圖譜可以看出,乙二醇子的氨基作用,其洗脫順序與樣品相對分子質(zhì)量和和乙二醇葡糖苷在200nm左右,紫外吸收非常弱,樣品羥基數(shù)和結(jié)構(gòu)都有很大關(guān)系。不能選擇紫外檢測器對樣品進檢測,因此在乙二醇第5期盧炳環(huán)等:乙二醇葡糖苷的分離純化37葡糖苷的純化過程中選擇示差折光檢測器對樣品目及位置有關(guān)。羥乙基葡糖苷的羥基數(shù)大于乙進行檢測。二醇,因此羥乙基葡糖苷的保留時間大于乙二醇,3.3乙二醇葡糖苷的純化乙二醇二葡糖苷的羥基數(shù)大于乙基葡糖苷,因此其HPLC是分離、分析糖類化合物的有效方法保留時間大于羥乙基葡糖苷。氨基鍵合相色譜一般是根據(jù)溶質(zhì)分子中官能團的由此,可以得出保留時間在4.3左右的是溶劑類型和數(shù)目進行分離的。氨基鍵合相上的氨基可峰,保留時間在9.7左右的是乙二醇二葡糖苷的吸與糖分子上的羥基優(yōu)先作用,糖類化合物的洗脫順收峰,保留時間為8.0左右是羥乙基葡糖苷的吸收序與相對分子質(zhì)量直接相關(guān),也與糖分子的羥基數(shù)峰,保留時間為5.7附近的是乙二醇的吸收峰。35000035000035000030000030003000000000002500002000020000200001500001500001500001000001000001000005000050000500000005100510時間/min時間/min時間/min(a)(b)(c)圖3HPLC圖 Fig.3 The HPLC results圖3(a)是收集的第74管的樣品,分離的結(jié)果用G10的凝膠進行分離。同時采用質(zhì)量分數(shù)0.2‰顯示:從收集的第66管開始出現(xiàn)乙二醇葡糖苷的的選氮化鈉水溶液作為流動相,若采用一定pH值峰。圖3(b)是收集的第78管的樣品,LC結(jié)果的緩沖溶液或氯化鈉溶液,也應該會對分離效果有顯示:從第78管開始有乙二醇流出。隨后,乙二醇一定的正面影響。的吸收峰強度越來越強,乙二醇葡糖苷的吸收峰逐4結(jié)語漸消失,直至最后只有溶劑峰出現(xiàn)。圖3(a)只有羥乙基葡糖苷和乙二醇二葡糖苷的吸收峰,說明葡糖1)采用萃取方法對乙二醇葡糖苷進行分離,并苷與乙二醇可以完全分離。圖3(c)中只有乙二醇研究了萃取劑比例對分離效果的影響。萃取劑選二葡糖苷,說明該純化方法也能實現(xiàn)乙二醇二葡糖用V(正丁醇):V(水)=4:1的體系較好。苷與羥乙基葡糖苷的完全分離。2)首次采用凝膠分離的方法,對乙二醇和乙二醇作者采用的是G15凝膠,若采用G10凝膠,分葡糖苷進行了分離純化。采用G15凝膠,流量為0.9離的效果應該會更好G15葡聚糖凝膠能分離相mL/min,結(jié)果表明用G15凝膠可以完全除去乙二醇葡對分子質(zhì)量小于1500的樣品,而G10葡聚糖凝膠糖苷中的乙二醇,缺點是要損失一部分葡糖苷。能分離相對分子質(zhì)量小于700的樣品,因此估計3)用G15葡聚糖凝膠不僅可以實現(xiàn)乙二醇與G10葡聚糖凝膠應該比G15葡聚糖凝膠有更好的乙二醇葡糖苷的完全分離,也能將乙二醇二葡糖苷分離效果。但G10的成本是比較高,以后可以嘗試和羥乙基葡糖苷完全分離。參考文獻(References):[1]金欣,張淑芬,楊錦宗,等.乙二醇葡糖苷的合成及保濕性研究]精細化工,2001,18(7):382-387 JIN Xin, ZHANG Shu-fen, YANG Jin-zong, et al. 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