飼料檢測HPLC法測定乙酰甲喹和喹乙醇的方法研究周艷飛李浛王亞芳北京市獸藥監(jiān)察所摘要建立高效液相色譜法測定恩諾沙星制劑中非法添加的乙酰甲喹與喹乙醇的檢測方法。色譜柱為 Atlantis仍35μm4.6mm×250mm,流動相為0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液(pH4.0)-乙腈(72:28),流速1.0mlJ/min,檢測波長365m,進樣量10μL。結(jié)果表明:乙酰甲喹的線性范圍為10~90μg/mL,線性方程為Y=29426X-11824(r=0.99993);喹乙醇的線性范圍為10~90μg/mL,線性方程為Y=26290X7254.3(r=0.9994)。該方法中乙酰甲喹回收率為99.00%~100.07%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差<0.8%;喹乙醇回收率為917%-10027%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差<0.·6%。結(jié)果表明,方法準(zhǔn)確可靠,適用于恩諾沙星制劑中非法添加的乙酰甲喹與喹乙醇的檢測。關(guān)鍵詞高效液相色譜法乙酰甲喹喹乙醇恩諾沙星制劑檢測中圖分類號:S816.17文獻(xiàn)標(biāo)志碼:B文章編號:1002-2813(2013)04-0067-03恩諾沙星屬于獸用第三代喹諾酮類藥物,稱為于中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。氟諾酮類藥物,是廣譜抗菌藥,目前成為獸醫(yī)臨床1.1.2供試品最常用的一類抗菌藥物,在感染性疾病的治療中發(fā)恩諾沙星可溶性粉,規(guī)格為100g:5g,批號為揮了非常重要的作用。喹乙醇和乙酰甲喹都具有廣1126,來源于北京中農(nóng)華正獸藥有限責(zé)任公司;譜抗菌作用,而喹乙醇具有蛋白同化作用,可以提恩諾沙星注射液,規(guī)格為5mL:0.125g,批號為高飼料轉(zhuǎn)化率與瘦肉率,促進動物生長。0110101,來源于北京立時達(dá)藥業(yè)有限公司;恩諾近年來,一些不法分子在獸用制劑中非法添加沙星溶液,規(guī)格為100mL:10g,批號為20120207,非處方物質(zhì),如:大量添加抗生素和抗病毒化學(xué)藥來源于北京瑞先農(nóng)科技發(fā)展有限公司。物,極易造成耐藥性的產(chǎn)生與動物性食品中藥物殘11.3試劑留,最終給人類的身體健康造成了危害。文章旨在甲醇,色譜純;超純水;磷酸二氫鉀,分研究建立高效液相色譜法測定非法添加的乙酰甲喹析純。和喹乙醇的分析方法。1.2儀器1材料與方法Waters高效液相色譜儀(c2695泵,298檢測1.1試驗藥品器);超純水機, MILLIPORE;電子天平, METTLER1.1.1對照品TOLEDO XP205;酸度計, METTLER DELTA320喹乙醇對照品,含量為99.5%,批號為1.3試驗方法H061103,來源于中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;乙酰甲喹131色譜條件對照品,含量為99.6%,批號為Ho0111008,來源色譜柱為 Atlantis9T35μm4.6mm×250mm,流動相為0.01mL磷酸二氫鉀溶液(pH40)-乙收稿日期:2012-12-31腈(69:31),第一作者:周艷飛,E-ml:dy92163cm進樣量10μL。H中國煤化工長365m,CNMHG飼料研究 FELD RESEARCH NO04.201167飼料檢測1.3.2溶液制備11824,r=0.99993;喹乙醇線性方程為Y=13.21稀釋液制備26290X-72543,r=0.9994,結(jié)果表明線性關(guān)稱取1.22g磷酸二氫鉀,加900mL水,溶解系良好。線性圖見圖1和2。后調(diào)節(jié)pH至4.0,加100mL乙腈,搖勻,即得。300萬250萬13.2.2對照品儲備液的制備00萬稱取25mg喹乙醇和25mg乙酰甲喹,精密稱150萬100萬量,置于同一100mL量瓶中,加適量稀釋液,超50萬聲溶解后稀釋至刻度,搖勻。1.3.23對照品溶液的制備質(zhì)量濃度/(μg·mL)精密量取2mL對照品儲備液,置于10mL量瓶圖1乙酰甲嗤線性圖中,加稀釋液稀釋至刻度,搖勻。此溶液質(zhì)量濃度250萬為50μg/mL。00萬1324對照品添加溶液的制備想150萬100萬精密量取2mL對照品儲備液,置于50mL量瓶中,加稀釋液稀釋至刻度,搖勻。此溶液質(zhì)量濃度為10μg/mL。質(zhì)量濃度/(μg·mL)13.25回收樣品溶液的制備圖2嗤乙酵線性圖取05g(或0.5mL)恩諾沙星制劑,分別精2.2精密度密添加喹乙醇和乙酰甲喹20、25和30mg,精密稱取對照品溶液,按照色譜條件重復(fù)連續(xù)進樣5量,置于同一50mL量瓶中,加稀釋液適量,超聲次,測定峰面積,結(jié)果表明:乙酰甲喹和喹乙醇峰溶解后稀釋至刻度,搖勻;精密量?、駇L,置10mL量瓶中,加稀釋液稀釋至刻度,搖勻。的峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于0.3%,表明此方法的儀器精密度符合要求。13.26檢測限樣品溶液的制備取0.5g(或0.5mL)恩諾沙星制劑,置;2.3穩(wěn)定性取對照品溶液,分別在0、2、4、8、16和24h50mL量瓶中,加適量稀釋液,超聲溶解后稀釋至測定峰面積,結(jié)果表明:乙酰甲喹和喹乙醇峰的峰刻度,搖勻。面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于0.4%。色譜圖見圖3。13.27檢測限樣品空白溶液的制備注:喹乙醇保留時間為2.977mn,乙酰甲喹保留時間為5376mne量取1mL檢測限樣品溶液,置于10mL量瓶中,加稀釋液稀釋至刻度,搖勻。吧0.05013.2.8檢測限溶液的制備量取1mL檢測限樣品溶液,加入一定體積的對照品添加溶液,置于10mL量瓶中,加稀釋液稀0010釋至刻度,搖勻5006.0072結(jié)果與分析時間/mn圖3對照品色譜21線性關(guān)系24檢測限精密量取10、3.0、5.0、7.0和9.0mL對照取檢測限溶液,按照色譜條件進行檢測,結(jié)果品儲備液分別置于25mL量瓶中,加稀釋液稀釋至表明:該法的檢測限為200mg/kg(mL)。色譜圖刻度。制成質(zhì)量濃度分別為10、30、50、70和見圖4~10。90μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列,按照色譜條件進行測定,以2.5加樣回收率試驗峰面積為縱坐標(biāo),被測物質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)取對照準(zhǔn)曲線,得到乙酰甲喹線性方程為Y=29426XYH中國煤化工100%和120%3組加樣回收CNMHG備3份平行樣,68飼料研究 FELD RESEAR(TNO04.20t3飼料檢滿!L與對照品平行進樣分析,按外標(biāo)法計算回收率。該方法中乙酰甲喹回收率為9900%-10007%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差<08%;喹乙醇回收率為9.17%-10027%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差<06%。結(jié)果見表1和2。0000m040050600700800裹1乙酰甲嗤回收率數(shù)據(jù)(n=3)添加質(zhì)量濃度測定參數(shù)可溶性粉注射液時間/min回收率圖8恩諾沙星注射液檢測限色譜相對標(biāo)準(zhǔn)偏差0.10.1100%平均回收率990015相對標(biāo)準(zhǔn)偏差0.0I120%平均回收率100.0799.4499.48相對標(biāo)準(zhǔn)偏差0.40.0002疃乙醇回收率數(shù)據(jù)(n=3)添加質(zhì)量濃度測定參數(shù)可溶性粉注射液溶液80%平均回收率時間/mn相對標(biāo)準(zhǔn)偏差圖9思諾沙星溶液空白樣色譜100%平均回收率99.209985相對標(biāo)準(zhǔn)偏差0.平均回收率99.5299.85相對標(biāo)準(zhǔn)偏差三汪0.oN070080000時間/min00005圖10恩諾沙星溶液檢測限色譜°012030405060103討論時間/min31色譜柱的選用圖4稀釋液色譜文章共選用4種型號色譜柱,分別為 Waters0015Atlantis35μm4.6mm×250mm、 Agilent ZORB-AXSB-Aq5μm4.6mmx250mm、 AKZONOBELKromasil10o-5C14.6mm×250mm和 Waters Sym70 metriC5μm4.6mm×250mm,經(jīng)過試驗證明時間/min色譜柱 Waters Atlantis T35μm4.6mm×250mm對圖5思諾沙星可溶性粉空白樣色譜于各組分的分離度均大于1.5,分離效果最好,柱效高,最終選用此柱進行試驗32檢測限測定量取1mL檢測限樣品空白溶液,分別加入需A、,元。0.05、0.1、0.2、0.3、0.4和.5mL對照品添加時間/r溶液,按照色譜條件進行檢測,同時記錄光譜圖圖6恩諾沙星可溶性粉檢測限色譜與色譜圖,添加樣品結(jié)果的失真質(zhì)量濃度是0.μg/mL(上機質(zhì)量濃度),因此將上機質(zhì)量濃度0.2μg/mL定為該法的檢測限,經(jīng)計算得出檢測限為200mg/kg(mL)00400500600700g009001000通信地址:北京市朝陽區(qū)安外北苑路甲15號時間/min圖7惠諾沙星注射液空白樣色譜中國煤化工107CNMHG飼料研究 FEED RESEARCH NO04.201369