生物學通報2007年第42卷第8期乙醚、乙醇用于果蠅麻醉的研究郝大翠姚明鏡劉焰(華寧農業(yè)大學植科院遺傳教研室湖北武漢430070)摘要在以果蠅成蟲為材料的實驗中,麻醉劑的使用劑量是實驗成功與否的重要環(huán)節(jié)。木研究結合乙醚、無水乙醉2種麻醉劑的特點,篩選出了乙醚—無水乙醇復合麻醉的最佳劑量。經(jīng)比較認為:醚;無水乙醇=1:1的配方具有安全范國寬、麻醉效果好的特點。并給出了其麻醉劑量、麻醉處理時間及其對應的麻醉效果等翔實的數(shù)據(jù)。有很好的實用性。關鍵詞果蠅麻醉劑量乙醚乙醇蘇醒率在遺傳學實驗教學工作中,果蠅麻醉是一個重要記錄開始麻醉時間、全部果蠅靜止不動時間、第的技術壞節(jié)現(xiàn)在普遍使用厶醚作果蠅麻醉劑,它具有只果蠅蘇醒時間、2h蘇醒只數(shù)、全部果蠅蘇醒時間麻醉快、蘇醒快的特點。但如杲劑量太小,果蠅保持昏計算昏迷時間和2h蘇醒率。麻醉時間是指果蠅從活迷狀態(tài)的時間短。常需要進行第2次麻醉。如果劑量躍狀態(tài)到紛紛墜人瓶底靜止不動的時間;昏迷時間是過大,昏迷時間雖然延長,但易造成過度麻薩而死亡。指從全部靜止不動至有1只恢復活動能力開始爬動麻醉程度的掌握和控制是個難點。我們在多年的實驗的時間。所需時間用分表示。蘇醒率是2h的蘇醒只教學及實驗材料準備工作巾,發(fā)現(xiàn)用乙醚一乙醇的混數(shù)/被試蠅數(shù)。合溶液作麻醉劑,果蠅靜止不動,可觀察的時間長,安1.2.2乙醚、L醇混合液不同比例試驗將乙醚、乙全范闈更寬。為此,本試驗擬從麻醉劑的配方、用量、醇按1:0、1:1、2:13:1的比例分設4個處理,以單的麻醉處理時間入手,改進對果蠅麻醉的方法,以達到乙醚為對照劑量設定為60μL、120μL、240μL,麻醉延長昏迷狀態(tài)的時間,并確保較高的蘇醒率的目的。的處理時間分成3min、5min、7min、9min。與121材料與方法所不同的是,當麻醉處理時間到,迅速拔掉棉塞,將被1.1材料黑腹果蠅( Drosophila melanogaster)野生型試蠅倒入培養(yǎng)皿里計數(shù)。3次重復。長中的果蠅數(shù)是3(紅眼,長翅,直剛毛)和突變型(白眼,小翅,焦剛毛)次重復之和昏迷時間是3個重復的平均值。記錄昏迷1.2方法時間和2h蘇醒率。1.2.1果蠅對乙醚、乙醇的耐受試驗我們分別將乙1.2.3不同果蠅品種對乙隧;無水乙醇=l:1混合液的醚、乙睥設定為30μ60μL、90μ、130μ、170μ反應選野生型和突變型果蠅,用乙醚:乙醇=1:1的混5種不同的劑量,麻醉前,選用長12cm,q3.8cm的指合液240μ,麻醉處理時間7min。麻醉方法和統(tǒng)計形試管,配上棉塞。在離試管底1cm處作上標記,制觀察方法同1.22作出1個約12cm3的小麻醉室(見下圖)。隨機取7d2結果分析2.1果蠅對乙醚、乙醇的耐受性:從表1可看出果拋對2種麻醉劑麻醉的速度隨劑量的增加而加快。30μL60μL、90μ、130μL、1705個不同劑量的乙醚處理,其麻醉的時間分別為4min、Imin、1min、0.83min0.5min;而無水乙醇處理組30μL~90μL的3個處理無1只達到靜止不動的狀態(tài)。當劑量增加到130μL.、170μL時,分別在19.0min、21.0min被試蠅才慢慢進入麻醉狀態(tài)。130μ處理下第1只果蠅蘇醒的時間比同劑量的乙醚處理推遲了124min。復蘇的情況差異更大。乙醚組130以下劑量處理的在120min以內果蠅小麻醉示意圖蘇醒以內的健壯成蠅裝入試管里,使每瓶有成蠅30只以14%中國煤化工乙醇8h后才蘇醒了無水乙醇處理8h、上。麻醉時,用移液槍吸取麻醉劑注入棉塞的中央位24hCNMH至低,分別為2.5%和置,迅速將棉塞推到離試管底部Icm處。使棉塞下端2%。由此可見,乙醚麻醉快,蘇醒快,復蘇率高,昏迷的弧線最低點與離瓶底1cm的橫線相交。置20-25℃時間短。而乙酵麻醉慢,所需劑量較大,但蘇厘慢,昏迷室溫下麻醉,24h內不拔掉棉塞。時間長,復蘇率低。2種麻醉劑單獨使用效果各有短2007年第42卷第8期長。若將這3種麻醉劑的特點結合將有可能獲得更好22乙醛、無水乙醇混合液使用結果分析的麻醉效果。221不同劑量、不同時間、不同比例純乙醚處理果表1果蠅對乙醚和乙醇的耐受極限比較蠅的麻醉狀況當乙(ck)劑量為60μL,麻醉處理蘇醒情況時間3mn時昏迷時間為186min,處理時間5-9min嘛劑(被試取醉昏迷全蘇2b8b:24b時昏迷時間均在20mn以上,這4種處理時間下的2h果蠅時間|時間醒時蘇醒率均在97%以上。但當乙醚的劑量增至120μL時數(shù)(min)(m間蘇圖蘇醒}蘇程|蘇醒蘇醒蘇醒aim數(shù)+(%)數(shù)伴()數(shù)(麻醉處理3min其昏迷時間可達26min以上,但2h蘇醒率降至87.6%,并隨處理時間延長及劑量的增加2h蘇醒率急劇下降6051121315110046s1222乙醚無水乙醇=3:1的不同劑量不同時間處理130390.833910139100下果蠅的麻醉狀況由表2可見當乙醚:無水乙醇=3:1170440.531156的比例時,劑量為60μL的各處理2h蘇醒率均在4910099%以上,但果蠅昏迷時間短,均低于14min;當劑量無水乙醇16041現(xiàn)象為240μ時昏迷時間均在22min以上,但2h蘇醒130491916300714|15/0率急劇降低,處理3mn時為938%,5mn時即降為3110070402336341%;當劑量為120μL時處理時間在5~9min的3個處理昏迷時間在21min-33.6min,2h蘇醒率均在表2乙醯、乙醇混合液、不同比例的試驗結果理時間乙醚:乙酵劑量3 min5 nin蠅數(shù)習昏迷時間2h蘇醒率果蠅數(shù)Σ昏迷時間劉2h蘇醚率果蛹數(shù)Σ昏迷時間x2h蘇醒率果蠅數(shù)】昏迷時間x2h蘇醒率60μL15520±1.01002.6±0.6987240101001364.7±0.611120u21390=10100213|2206991m7240±1099187253213517732631353±0.660μL103100101001351161.598495140±069116+0610012714010100174146±23165183±49956240μL159183±2500172220+569812928.0±3087481463±10060160μL1396.0±5.2993114|83±4.711610.0x46100136±2.110010ul1311176+0625277+2.3100185336±0.6:99540μ178226+2393819637.6±063411483861547460μ149186±1510016421.01.09.0132227x2311023.6±21乙磕CK120叫110266±128761142762159.3135270103721052934.2;49.5113.0±93.21391490±130*本處理第3重復無一只蘇醒,故無法計算昏迷時間99%以上,從昏迷時間及安全性兩方面考慮,此3個處1:1的混合液劑量為120μL和240μL,處理時間分別理是可用的配方劑量處理時間組合。為5、7、9min時,果蠅的昏迷時間均在22min以上,最223乙醚:無水乙醇=2:1的不同劑量不同時間處理長者為9min處理時的35min,2h蘇醒率均在98%下果蠅的麻醉狀況表3中乙醚:無水乙醇=2:1時,以上,處于昏迷狀態(tài)時間長、安全性好;當劑量為僅有劑量為240μL,處理時間5min的處理,果蠅的昏60μ時的各種時間處理及120μ、240μ3min處迷時間達到22min,同時2h蘇醒率達98%,從昏迷理下,盡管2h蘇醒率都在97%以上,但昏迷時間均不時間和安全性上看此配方劑量/處理時間組合較適用到20min60μL、120μL劑量下各處理及240μL3min的處理23不同果蠅品種對乙醚:無水乙醇=l:1麻醉劑的反雖2h蘇醒率在95%以上,安全性好,但昏迷時間太應戀刑里崛葉M乙醚無水乙醇=1:1的短在18.3min以下;240μ/7min及240μL)min處麻醉中國煤化工森醉狀況見表3。野生理雖延長了昏迷時間,但2h蘇醒率急劇下降,分別型的CNMHG型為256min,2品種為874%和601%,安全性差?；杳詴r間無明顯差異,其2h蘇醒率均為100%。結果224乙醚:無水乙醇=1:1的不同劑量不同時間處理表明乙醚:無水乙醇=1:1的混合液不論是對生活力強下果蠅的麻醉狀況表2中顯示,當乙醚:無水乙醇=的野生型還是對生活力很弱的突變型果蠅均適用。2007年第42卷第8期表3不同果蠅品種對乙醚:乙醇=1:1的混合液反應是不一樣的。本實驗有16個配比/劑量/時間組合1次處理:240H7mn麻醉其昏迷時間在15-33min、(昏迷時間在20min品種其效果明顯優(yōu)于“幾滴乙醚,半分鐘”的原方法。其中野生型(紅限、長翅,直剛290±3.6突變型(白眼、短翅、焦以蠅數(shù)(E)昏速時同mm()2b蘇醒率以上的有10個組合)2h蘇醒率在98%以上(見表2)256±4500乙醚:乙醇=1:1的配比適用的劑量/時間組合范圍寬,它不僅適于對生活力強的野生型果蠅的麻醉,對生活3討論力很弱的突變型也同樣安全有效。1)在目前使用的多種遺傳學實驗教材中,用于果5)在麻醉空間不變的情況下,麻醉劑的用量,和蠅雜交的麻醉方法一般都是依照“幾滴乙醚、半分鐘”麻醉處理的時間是可以調控的。使用者可以根據(jù)實際的原則其具體操作方法多種多樣,因為沒有限定麻醉需要在表2中選取所需要的麻醉劑量及麻醉處理時劑量和麻醉空間麻醉效果各不相同。我們曾以4、6、8間的參數(shù)。這一結果,是對“幾滴乙醚,半分鐘”的原方滴的劑量半分鐘的麻醉時間做過對比實驗。其昏迷時法進一步完善,不僅在遺傳學實驗教學中方便了教師間過短,分別為43min、8.0min、8.3min,難以滿足實對學生完成麻醉技術的指導,對以果蠅為材料的研究驗教學及實驗材料準備的實際需要工作者也具有一定的實用價值。我們認為擇迷時間在20min左右,2h以內有6)本試驗發(fā)現(xiàn)川乙醚、乙醇混合液麻醉后蘇醒的98%以上的被試蠅能蘇醒則該麻醉深度對雜交親本而果蠅,基本上能正常交配和產卵并繁殖后代。但其對言是合適的。既能給學生足夠的操作、觀察時間,勿需果蠅及后代的生活力、體質方面的毒理作用還有待進2次麻醉;也能確保高復蘇率;提供足量、健壯的受試步研究。主要參考文獻2)若使用單一乙醚作果蠅麻醉,從昏迷時間和安1余君,遺傳學實驗指導北京:農業(yè)出版社,91全性兩方面考慮,有必要在“幾滴乙醚、半分鐘”的基2燕慧民,袁靜遺傳學驗武漢:武漢大學出版社,194礎上減少乙醚用量延長麻醉處理時間。本試驗表2中3盧龍斗,常重杰遺傳學實驗技術北京:中國科學技術大學出版乙醚用量60μL(約2滴)麻醉處理時間3-7min,昏社,1996迷時間可達186-22.7mn,2h的復蘇率99%以上。4楊大翔遺傳學實驗北京:科學出版社,20045工建波方呈祥鄢慧民等遺傳學實驗教程,武漢:武漢大學出版3)根據(jù)本試驗結果,若乙醚-乙醇混合使用,能在社,2004麻醉速度、昏迷時間、耐受程度、復蘇率多方面取長補6劉祖洞汪紹慧灘傳學實驗第2版北京:高等教育出版社1987短,能起到加強麻醉效果的作用。是較好的復合麻醉7張貴友吳瓊林琳.洪通遺傳學實驗指導北京:清華大學出版社,4)乙醚和乙醇的配比不同,麻醉昏迷時間效果也(E-mail:haodacui@mail.hzau.edu.cn)(BF)血液蛋白質預示心臟病風險膽固醇”〈低密度脂蛋白)氧化,導致動脈粥樣硬化。它還會損膽固醇”(高密度脂蛋白對身體的保護作用,并減少有時候,一個人明明看上去非常健康,其實患心臟病的風液中一氧化氮含量而一氧化氮是放松血管、使其柔欽通暢的險很高?？茖W家新近發(fā)現(xiàn)了解釋這種怪現(xiàn)象的一個線索:血液重要物質。中的一種蛋白質會損害心血管系統(tǒng),其含量過高是心臟病的早以往的研究曾經(jīng)發(fā)現(xiàn)心臟病患者體內血清髓過氧化酶含期預兆。量高,荷蘭科學家的這項新研究是針對健康人患心臟病風險與這種蛋白質被稱為l清髓過氧化酶(MPO),由血液里的血清髓過氧化酶含量之問關系的首次大規(guī)模研究。1993-1997白細胞分泌。它的任務原本是殺滅有害細菌,但荷蘭醫(yī)學學術間,英國諾?？丝ぞ用駞⑴c了一項關于癌癥和營養(yǎng)的研究,中心的一個研究小組在即將出版的《美國心臟病學院周刊》土這些研究對象的血樣被冰凍保存下來,荷蘭科學家在新研充中報告說,該蛋白質會造成動脈發(fā)炎,破壞血液里的保護性物重,利用了有關數(shù)據(jù)和血樣在心臟病的典型癥狀出現(xiàn)之前很久,血清髓過氧化酶含量增加后平均又生的時間甲這批研究對象中有1138就發(fā)出了有害物質積累的信號人患中國煤化工同、年齡相近的人群中科學家認為,這項成果開辟了心臟病研究和診斷的一個與末CNMHG年參與研究時留下的血新領域。詳細研究相關病變過程,將有助于利用血液來及早發(fā)樣中血清髓過氧化酶含量明顯更高?，F(xiàn)患心臟病風險較高的人。血清髓過氧化酶會使人體內的“壞輛自《科學時報》2007年7月5日