遼寧大學(xué)學(xué)報(bào)JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY自然科學(xué)版Natural Sciences edition第41卷第4期2014年Vol 41 No 4 2014白果黃酮的提取工藝研究孟凡瑞',劉宇,劉波2,李曉秀2,劉洋,孔玉梅',王丹1(1.遼寧大學(xué)藥學(xué)院,遼寧沈陽1006;2.沈陽醫(yī)學(xué)院,遼寧沈陽110034)摘要:目的:優(yōu)化白果黃酮的提取工藝方法:采用閃式提取器提取白果黃酮,以白果黃酮的提取量為檢測指標(biāo),利用正交試驗(yàn)法對影響白果黃酮提取量的因素進(jìn)行評價,并對白果黃酮含量進(jìn)行測定結(jié)果閃式提取白果黃酮的最佳提取工藝為:乙醇濃度為80%,液料比30:1,浸泡12h在此條件下,3次提取白果黃酮的平均提取率為0.063±0.007%,結(jié)論:正交試驗(yàn)優(yōu)選出的白果黃酮提取工藝簡單,重復(fù)性好關(guān)鍵詞:白果黃酮;閃式提取;正交試驗(yàn)中圖分類號:R284.2文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A文章編號:1000-5846(2014)04036940Extraction Process of Ginkgo FlavonoidsMENG Fan-rui', LIU Yu, LIU Bo2, LI Xiao-xiu2, LIU Yang, KONG Yu-mei, WANG Dan(1. College of Pharmacy, Liaoning University, Shenyang 110036, China2. Shenyang Medical College, Shenyang 110034, China)Abstract: Aim: To optimize the extraction process of ginkgo flavonoids. Methods Ginkgoflavonoids were extracted by flash extractor, the amount of ginkgo flavonoids extract was asassessment scale, and the factors affecting the extraction rates were evaluated by orthogonal testThe amount of ginkgo flavonoids was determined. Result: The results showed that the optimumextraction method of ginkgo flavonoids by flash extractor was 80% ethanol concentration, 30:1liquid ratio, soaking 12 h. Three times average extraction rate of ginkgo flavonoids was 0. 0630. 007% under the conditions. Conclusion: The extraction process of ginkgo flavonoids optimizedin the experiment is simple and high reproducibleKey words: ginkgo flavonoids; flash extraction; orthogonal test收稿日期:2014-06-28基金項(xiàng)目:遼寧省教育廳科研項(xiàng)目(L2013011)作者簡介:孟凡瑞(1979-),男博士,講師,主要從事天然產(chǎn)物提取及藥理作用YHa中國煤化工CNMHG370遼寧大學(xué)學(xué)報(bào)自然科學(xué)版2014年0引言銀杏( Ginkgo biloba)又名白果樹,為銀杏科,銀杏屬植物.我國銀杏主要分布于遼寧、江蘇、浙江、云南和四川等地,擁有量占世界總量的70%以上白果為銀杏的種子,營養(yǎng)豐富,是一種很名貴的果品.白果也作為藥材使用,在我國中醫(yī)古書中白果一直被列為重要藥材,現(xiàn)已收錄到中華人民共和國藥典.白果性味甘苦澀、平、有微毒,歸肺、心及腎經(jīng);具有斂肺氣、定喘嗽、止帶濁及縮小便的功效,主治哮喘、痰嗽、白帶白濁、遺精淋病及小便頻數(shù)等2-3)目前,對銀杏中黃酮的研究主要集中在銀杏葉片,從銀杏葉中已分離出40余種黃酮,主要為單黃酮類和雙黃酮類.現(xiàn)已證實(shí),銀杏葉中含有的黃酮類化合物具有優(yōu)異的抗氧化活性、抗腫瘤活性防治心血管疾病和增強(qiáng)免疫力等作用26,然而,對白果中的黃酮研究較少,本實(shí)驗(yàn)通過閃式提取器提取白果黃酮,正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化白果黃酮的提取工藝,并對白果中的黃酮含量進(jìn)行測定,為白果黃酮的進(jìn)一步研究提供科學(xué)依據(jù)1材料與方法1.1材料與試劑白果,采摘于遼寧大學(xué)校園,經(jīng)沈陽藥科大學(xué)中藥學(xué)院中藥分析與鑒定教研室路金才教授鑒定為銀杏種子(白果),憑證標(biāo)本(20121031)存于遼寧大學(xué)藥學(xué)院藥物化學(xué)二室蘆丁購于中國藥品生物制品檢定所.95%乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、石油醚和甲醇購于富宇精細(xì)化工有限公司.其他試劑為國產(chǎn)分析純1.2儀器與設(shè)備紫外/可見分光光度計(jì)(UV-2550,日本島津儀器公司),閃式提取器(JHBE-50T,河南金鼎科技發(fā)展有限公司),多級閃蒸器(JMF-320,河南金鼎科技發(fā)展有限公司),旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RE52-99,上海亞榮生化儀器廠)超聲振蕩清洗儀(KQ5200E,昆山市超聲儀器有限公司),真空干燥箱(DZF-6020,鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司),電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(GzX-9246MBE,上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠),精密電子天平(TB-114,北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)1.3總黃酮含量測定精密稱取5.0mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)樣品,用70%乙醇溶解后,定容至10mL,吸取0.4,0.6,0.7,1.0,1.2,14mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液于相應(yīng)標(biāo)號的24孔板中,在各孔加入0.2mL的5%NaNO2溶液,充分震蕩搖勻后靜置6min,加入0.2mL的10%A(NO2)3溶液搖勻靜置6min,然后加入2mL的4%NaOH,用50%乙醇定容5mL,搖勻并靜置10min,每個樣本吸取4mL,加入96孔板,510mm波長處測定吸光度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.白果黃酮的含量測定應(yīng)用相同方法1.4白果黃酮最佳提取條件的確定根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)資料”和預(yù)試驗(yàn)選取不同的乙醇濃度(A)、液料比(B)、浸泡時間(C)為考察化工牛.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)H G第4期孟凡瑞,等:白果黃酮的提取工藝研究3712結(jié)果與分析2.1微板法測量黃酮含量在本實(shí)驗(yàn)中對白果黃酮含量進(jìn)行的測定取得很好的線性關(guān)系,其標(biāo)準(zhǔn)曲線為:y=60634x+0.0086,R=0.9997,如圖1所示2.2單因素試驗(yàn)2.2.1酒精濃度對提取的影響固定試驗(yàn)條件:選取浸泡時間6h液料比為10:1,設(shè)酒精濃度分別為50%,65%,80%,95%考察酒精濃度對白果黃酮提取率的影響,結(jié)果如圖2所示v=6.0634x+0.008600.020.040.060.080.10.120.1450%60%70%80%90%依度(mg/m)乙醇濃度圖1蘆丁濃度一吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖2乙醇濃度對白果黃酮提取率的影響由圖2可以得到,乙醇濃度為80%時,白果黃酮的提取率最大,再加大溶劑用量,提取率反而降低故以濃度80%為中間點(diǎn),選取濃度65%,80%,95%乙醇作為正交試驗(yàn)水平2.2.2液料比對提取的影響固定試驗(yàn)條件:選取浸泡時間6h、乙醇濃度為80%,設(shè)計(jì)液料比(mL/g)分別為5:1,10:1,20:130:1,40:1,考察液料比對白果黃酮提取率的影響,結(jié)果如圖3所示由圖3可以得到,液料比為20:1時,白果黃酮提取率達(dá)到平臺期,再加大溶劑用量,提取率反而降低故以液料比20:1為中間點(diǎn),選取10:1,20:1,30:1作為正交試驗(yàn)水平223浸泡時間對提取的影響固定試驗(yàn)條件:選取乙醇濃度為80%,液料比20:1,設(shè)計(jì)浸泡時間分別為0,6,12,18,24考察浸泡時間對白果黃酮提取率的影響,結(jié)果如圖4所示00000料液比中國煤化工圖3液料比對白果黃酮提取率的影響CNMHG響372遼寧大學(xué)學(xué)報(bào)自然科學(xué)版2014年由圖4可以得到浸泡時間為12h時,赤芍總苷提取率最大,18h后提取率隨浸泡時間延長而降低,故選取0,6,12h作為正交試驗(yàn)水平2.3正交試驗(yàn)結(jié)果2.3.1正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)選取乙醇濃度(A)、液料比(B)浸泡時間(C)為考察因素按L(33)正交試驗(yàn)表安排試驗(yàn),其試驗(yàn)因素水平見表12.3.2正交試驗(yàn)結(jié)果及分析在L(33)正交試驗(yàn)中各因素和水平共組建9種組合方式,每組試驗(yàn)結(jié)果及分析見表2和表3由表2數(shù)據(jù)中極差可以看出,影響白果黃酮提取效果的因素依次為A>C>B,其中B因素是最主要因素經(jīng)表3方差分析可知,A因素具有顯著性影響C、B因素在試驗(yàn)水平范圍內(nèi)影響不顯著,最優(yōu)的提取工藝為A2B3C3,即80%乙醇閃式提取液料比30:1,浸泡12h.在此條件下,3次提取白果黃酮的平均提取率為0.063±0.007%(n=3)表1正交試驗(yàn)因素水平表水平乙醇濃度(%)液料比(mL/g)浸泡時間(h)230:1表2L(3)正交試驗(yàn)結(jié)果表序號乙醇濃度(%)液料比(mL/g)浸泡時間(h)提取量(mg)142.2753.7952.6745.6851.50R11.106.07表3方差分析方差來源平方和自由度均方F值顯著性15.767.880.77誤差11.1825.59V中國煤化工注:*表示差異顯著,P<0.CNMHG第4期孟凡瑞,等:白果黃酮的提取工藝研究3733結(jié)論實(shí)驗(yàn)對白果黃酮的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化,得到最優(yōu)的提取工藝為:80%乙醇閃式提取,液料比30:1,浸泡12h在課題組以前的提取實(shí)驗(yàn)中,對黃酮的提取的最佳工藝為70%酒精,在實(shí)驗(yàn)中最佳提取工藝的酒精濃度為80%,可能是白果黃酮多為極性較小的黃酮類化合物0.在最佳提取條件下,3次提取白果黃酮的平均提取率為0.063±0.007%,實(shí)驗(yàn)中測得的白果黃酮含量于文獻(xiàn)報(bào)道的一致13實(shí)驗(yàn)測得的白果品種的黃酮量要低于一些優(yōu)質(zhì)品種的黃酮含量3.因此,本實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了白果黃酮的提取工藝,為白果黃酮的進(jìn)一步研究提供科學(xué)依據(jù)參考文獻(xiàn)[1]國家藥典委員會中華人民共和國藥典[M]北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:71[2]王琴,溫其標(biāo)銀杏種仁中活性成分及其藥理作用的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代食品科技,2006,22(1):164-167[3]趙春芳,朱立學(xué)白果活性成分的提取及其功效研究進(jìn)展[J].仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院學(xué)報(bào),2009,22(4):67-70[4]孟凡瑞劉波,李曉秀,等白果提取物抗腫瘤作用的研究[J]遼寧大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2014,41:286-288[5]姜國芳,謝宗波,樂長高銀杏葉黃酮類化合物的研究進(jìn)展[J]時珍國醫(yī)國藥,2004,15(5):306[6 Tulsulkar J, Shah Z A Ginkgo biloba prevents transient global ischemia-induced delayed hippocampal neuronaldeath through antioxidant and anti-inflammatory mechanism[ J]. Neurochem Int, 2013, 62(2): 189-197.[7 Barreca D, Bisignano C, Ginestra G, et al Polymethoxylated, C-and O-glycosyl flavonoids in tangelo( Citrusreticulata x Citrus paradisi)juice and their influence on antioxidant properties [J]. Food Chem, 2013, 141(2): 1481[8]陳文英,王成章,高彩霞,等白果中總黃酮的含量及其油脂的化學(xué)成分研究[冂].生物質(zhì)化學(xué)工程,2006,40(6):6-8.[9]陳立江段洪云張勝,等赤芍中芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷雙指標(biāo)考察赤芍總苷提純工藝優(yōu)化[J食品科學(xué),2011,32(12):96-100[10]劉玉峰,王程程,劉洋,等閃式提取赤芍總苷的工藝研究[J].現(xiàn)代食品科技,2012,28(4):416-419[11]曹幫華,馬?；?梅林銀杏種仁黃酮與內(nèi)酯含量變化初探[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué),203,1:16-19(責(zé)任編輯李超中國煤化工CNMHG