實驗研究2010年4月第7卷第12期石斛多糖提取工藝的研究陳蕤(廣州科技職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)藥營銷系,廣東廣州510550)[摘要]目的:對石斛多糖提取工藝進行優(yōu)化。方法:比較不同浸提溫度時間和除蛋白方法對多糖得率的影響優(yōu)化工藝。結(jié)果:石斛多糖最佳提取工藝條件為90℃水浸提3-4h,料水體積比為1:50,采用 Sevag法脫蛋白,樣品- Sevag溶液=1:1、氯仿-正丁醇=10-2.5,提取時間為30min。結(jié)論:此方法提取石斛多糖得率高,為理想的提取條件關(guān)鍵詞]石斛;多糖;提取工藝[中圖分類號]R2842[文獻標識碼A[文章編號]1673-7210(2010)04(c)-040-03Extraction technology of polysaccharide in DendrobiumCHEN RuiMedical Promotion Profession, Guangzhou Vocational College of Science and Technology, Guangzhou 510550, China[Abstract] Objective: To study optimum extracted -conditions of polysaccharide in Denderobiun. Methods: The mostyield of polysaccharide was gotten which volume ratio of dendrobium to water, distilling temperaturethe and method of iso-lating protein were used. Results: The effects was best when volume ratio of dendrobium to water was 1: 50, distilling at 90C for 3-4 hours, isolating protein by seveg method in the mixture composed of 50% sample and 50% sevag solution, the raio of chloroform and n-butano was 1025, the extraction technology was 30 min. Conclusion: The extraction method is per-fect because the most yield of polysaccharide is gotten[Key words] Dendrobium; Polysaccharide: Extraction technology石斛屬植物具有很高的藥用價值。而多糖類成分是石斛得率中具有免疫增強作用叫和抗腫瘤作用的活性成分,常以多糖24蛋白去除方法的選擇的含量高低來判斷石斛藥材質(zhì)量的高低。本研究對石斛多糖本實驗運用 Sevag法、TCA法去除石斛多糖中的蛋白的提取工藝進行優(yōu)化探討,為其工業(yè)化生產(chǎn)和利用提供理論質(zhì)。241 Sevag法多糖提取液,真空抽濾,濃縮至一定體積,1儀器與試藥按比例加入氯仿-正丁醇混合液,劇烈振蕩,以5000r/min11儀器的轉(zhuǎn)速離心15min,取上清液。如此反復(fù)操作3次。為取得儀器設(shè)備有ES204型萬分之一天平,電熱恒溫水浴最佳的實驗效果對提取條件設(shè)計了正交試驗,因素水平鍋,RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器758B型紫外可見分光光度計。,見表112試藥石斛(四川樂山市歇馬鄉(xiāng),經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)嚴鑄云教豪1Sag法脫蛋自正交設(shè)計授鑒定為細莖石斛)洗凈殺青后于60℃烘干,粉碎,過50目Tab 1 Factors and their levels of the Sevag method篩備用。本實驗所用試劑均為分析純2方法與結(jié)果因素( v aavs2.1提取工藝口s1:110:2520取石斛粗粉約50g,加人石油醚(60-90℃)250ml,回流提取1h,脫脂,過濾,揮干溶劑,加人80%乙醇250ml,回流提取1h,過濾,揮干溶劑加入蒸餾水浸提2次,趁熱過濾,242TCA法多糖提取液,以5000mmin的轉(zhuǎn)速離心15min減壓濃縮至150m,0.%活性炭脫色,過濾,脫蛋白,加入取上清液加入草酸調(diào)整pH至pH=7,加入適量3%的TCA沉95%乙醇使溶液含醇為80%,于冰箱中靜置過夜,沉淀物用淀蛋白質(zhì)調(diào)整pH至pH=7放置過夜,以500mmin的轉(zhuǎn)速無水乙醇、丙酮、乙醚依次洗滌,烘干,得石斛多糖粗制品。離心15min,取上清液。如此反復(fù)操作3次,取平均值。22加水量的選擇25極越合的測定方法原料與水體積比分別為1:20、1:30、140、1:50、160,比較中國煤化工含量測定其多糖得率。26結(jié)CNMHG23浸提溫度的選擇26.1不兩示體頁對們贈多何平的影響見圖1。分別在80、85、90、100℃C條件下浸提3~4h,比較其多糖262不同浸提溫度對石斛多糖得率的影響見圖2。40醫(yī)藥報 CHINA MEDICAL HERALD2010年4月第7卷第12期實驗研究3討論2243.1石斛多糖提取前除雜質(zhì)22222.0石斛多糖提取前,先用石油醚或乙醚回流提取,可以除去石斛植物中的脂溶性雜質(zhì)及干擾性色素,而后用80%乙醇回流,除去蛋白質(zhì)及氨基酸等32石斛多糖浸提時加水量的選擇由圖1可知,加水量影響石斛多糖得率,隨著加水比的增加,石斛多糖的提取率呈上升趨勢。若加水比例過少,在沒有達到最佳浸提時間之前,浸出液已經(jīng)變得很少甚至糊鍋1:401:501:60從而影響多糖得率。如果加水過多的話,則以后的濃縮過程圖1加水量對石斜多糖提取率的影響較繁雜,所以選擇原料與水的比例為1:50。Fig 1 Effect on water content on the extraction rate of33石斛多糖浸提溫度的確定由圖2可知,在90℃條件下浸提3~4h,可達到較多的多糖得率。浸提時,溫度過低則導(dǎo)致溶劑的滲透能力和溶劑能力降低,使多糖不能有效溶出,溫度過高則使得多糖被破壞,使多糖得率降低。34活性炭脫色多糖成分中會存在一些殘留色素,因此需要用活性炭脫色門,加入后應(yīng)多保留幾分鐘,使其脫色完全。35多糖提取過程中脫蛋白方法的選擇可得知ABC3為最佳組合,即Ⅴ樣氯你正丁=1:1、V重:Vgr=10:25、提取時間為30min時效果最佳,多糖得率為75808圖2溫度對石解多糖提取率的Sevag法脫蛋白的效果好于TCA法粗多糖得率及多糖Fig2 Effect on temperature on the extraction rate of polysaccharide含量均較高,所需時間較短,但 Sevag法也存在著重復(fù)多次產(chǎn)生較多有機物質(zhì)等弊端;而TCA步驟較簡單,所用試劑較263 Sevag法脫蛋白的正交試驗結(jié)果石斛多糖提取過程少,色素物質(zhì)能在TCA液中隨蛋白質(zhì)沉淀而部分除去,有利中應(yīng)用Seag法脫蛋白的正交試驗結(jié)果見表2, Sevag法與于層析精制,但所需時間較長。因此筆者認為采用seagTCA法比較結(jié)果見表3。法除去石斛多糖中的蛋白質(zhì)更為合適。3.6多糖沉淀的分離、洗滌、干燥表2正交試驗結(jié)果經(jīng)乙醇沉淀后的多糖可通濾紙過濾、抽濾或者離心沉Tab 2 Results of the orthogon淀等分離得到,濾紙表面粗糙,過濾速度慢,消耗時間多,料C多糖得率(%)在上面的多糖不易洗脫,多糖獲得率會因此降低,因此在分20.98離時選用離心沉淀。粗制品烘干前用無水乙醇、乙醚涮洗,可除去多余水分。丙酮需加長洗滌時間、加大用量,盡量除去石2081斛多糖中的色素。粗多糖的干燥可采用自然干燥、高溫烘干22233323231等。為實驗室操作方便,本實驗采用70-80烘干至恒重的2049方法。1968本實驗確定石斛多糖最佳提取工藝條件為90℃水浸提1933-4h,料水體積比為1:50,采用 Sevag法脫蛋白樣品:氯仿2035正丁醇=1:1(Vv)、氯仿:正丁醇=10:25(V:v)、提取時間為20.191951192230min,粗多糖得率為147%,多糖質(zhì)量分數(shù)為2247%,需要Kz21.262086進一步純化精制。本結(jié)果促進了石斛藥材的規(guī)?；N植,為19722080藥材的工業(yè)化生產(chǎn)和利用提供理論基礎(chǔ)。參考文獻3seag法與TcA法提取結(jié)果比較[幅的究云南植物研究1994,16ab3 Companson between Sevag method and TCA method粗多糖得率(%)多糖質(zhì)量分數(shù)(%)Sevag法2247YH中國煤化工CNMHG細胞株生長抑制作用體外死與廾友141-3TCA法1985(下轉(zhuǎn)第43頁)CHINA MEDICAL HERALD醫(yī)藥導(dǎo)報412010年4月第7卷第12期·臨床研究檢驗。P<005為有顯著性差異。血栓形成增加腎血流量的作用,還能升高血漿清蛋白,雙向2結(jié)果調(diào)節(jié)機體免疫功能;穩(wěn)定缺糖、低氧的心肌細胞膜,保護線粒經(jīng)治療后實驗組與對照組療效、住院時間及不良反應(yīng)比體和溶酶體,增強抗低氧能力,保護心肌細胞;降低心率減較見表1少心肌對氧的需求,又可維持相對高的心率而保證一定的心排出量和冠狀動脈流量,以保證心肌供血。上述作用互相依組治療后療效比較情況(例附、相輔相成,即中醫(yī)稱為“血以載氣,氣以運血”的觀點?？傆行?%本組中應(yīng)用中兩醫(yī)結(jié)合治療增加了冠狀動脈流量保護實驗組958341了急性心肌缺血低氧所致的心肌損傷,維持了細胞膜的完整與對照組比較,P<005性,增加缺血區(qū)邊緣的毛細血管,有利于側(cè)支循環(huán)的建立,加快損傷細胞的修復(fù);改善微循環(huán),抗血小板聚集和血栓形成,表2兩組住院時間和不良反應(yīng)比較(無±s,d)并且能改善血液流變學(xué)網(wǎng)。清除自由基包括超氧陰離子和羥組別例數(shù)「住院時間不良反應(yīng)(例)自由基對心肌細胞的損傷;能促進主動脈內(nèi)皮細胞分泌組織實驗組型纖溶酶原激活物,從而提高機體抗凝和纖溶活性,維持血管內(nèi)血流暢通,使治療效果大為提高。與對照組比較,P<005由本研究結(jié)果可知,中藥治療心肌缺血療效顯著、不良反應(yīng)少,而且價格低。中西醫(yī)結(jié)合治療方法對缺血、心肌損傷3討論起到了積極的保護作用,抑制了心室重構(gòu)、心肌纖維化的發(fā)心臟是一個機械做功的器官,這就決定了它具有高耗生與發(fā)展,是治療心肌缺血的新途徑。本研究以中西醫(yī)結(jié)合能、高耗氧、高代謝率的特點。心肌的氧攝取率高達70%,當?shù)姆椒ㄖ委熜募∪毖岣吡嘶颊叩念A(yù)后及生活質(zhì)量。雖然心肌耗氧增加時再提高氧攝取率的潛力很小,需靠擴張冠中醫(yī)治療還缺乏統(tǒng)一的診療標準但是筆者相信隨著臨床研狀動脈、增加血流量以增加氧的供給。任何造成心臟耗氧增究水平的不斷提高在臨床與實驗的密切配合下,一定會研加和(或)供氧減少的因素都影響心臟做功。心肌有氧氧化的究出治療心肌缺血的高效、安全的方藥,為心肌缺血的治療能力強而耐低氧能力差。正常情況下,心肌的代謝基本上全開辟新的途徑是需氧的明。所以,氧是心肌細胞活動必不可少的物質(zhì),而氧參考文獻]是通過血液輸送給細胞的。心臟沒有“氧倉庫”,完全依賴心[國際心臟病學(xué)會和協(xié)會及WHO命名標準化聯(lián)合專題組缺血性心臟肌血供,一旦缺血,立刻會引起低氧。低氧的直接后果是心肌病命名及診斷標準J中華心血管雜志1981901)75-76細胞有氧代謝減弱,產(chǎn)能減小,使心臟活動時必需的能量供2]陳新謙新編藥物學(xué)M16版北京人民衛(wèi)生出版社200380應(yīng)不足,引起心絞痛、心律失常、心功能下降。近年來臨床治因陳灝珠實用內(nèi)科學(xué)M]12版北京人民衛(wèi)生出版社2051471.療多傾向于中藥和西藥相配合據(jù)相關(guān)研究表明中草藥抗心周Kin且,ZmtA, Lofye MT.eta. Postconditioning reduces infarctvia adenosine receptor activation by endogenous adenosine U] Cardiovasc肌缺血效果非常顯著,如葛根、丹參、人參、銀杏葉等中草藥Res200567(1):124133經(jīng)實驗研究證實有抗心肌缺血作用,其所含有效成分部分已5邵耕林傳驤現(xiàn)代冠心病北京北京醫(yī)科大學(xué)、中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)分離鑒定并用于臨床。聯(lián)合出版社1994258-282本研究中通過中西醫(yī)結(jié)合治療心肌缺血有效率達細野史郎漢方藥理漢方與臨床19924743%原因在于丹參的化學(xué)成分有抗心絞痛的作用。20世陳玉珍丹滲滴丸合蔗加生脈欣治療無建狀心肌缺血56例長春中紀70年代將丹參注射液及總提取物制成片劑用來治療心腦圖陳旭胡春杰陳日,川芎嗪注射液治療冠心病心絞痛的臨床研究吉血管疾病有良好效果,至今仍為一種常用藥在臨床使用網(wǎng)。本林中醫(yī)藥2007271)53-54方具有增強心肌收縮力消除體內(nèi)氧自由基,擴張血管,減少(收稿日期:201001-04)(上接第41頁)門王權(quán)淳分析數(shù)理統(tǒng)計與質(zhì)量控制北京:人民衛(wèi)生出版社1991櫪云馮衛(wèi)生孟江等正交試驗法優(yōu)選大棗渣多糖水煎煮提取工藝中藥新藥與臨床藥理2003,14(3)200-2028]張西玉三種川產(chǎn)人工栽培石解的多糖含量測定樂山師范學(xué)院學(xué)4減玉紅,牛桂玲李麗娟等滑子菇水溶性多糖提取工藝的研充門食品報2004.195)88-89科技20011115-1819白五靜佟麗華香菇多糖提取工藝和含量測定方法研究門黑龍江醫(yī)5胡雪瓊吳紅棉郝志明等平菇多糖的提取工藝小湛江海洋大學(xué)學(xué)藥科學(xué)200629報,200424(3)656916李瑞趙浩加陳乃林白花蛇舌草多糖除蛋白的方法研究]江蘇中醫(yī)中國煤化工斷工老的丸食品與發(fā)藥,200324(0056-5CNMHG(收稿日期:2001-08)CHINA MEDICAL HERALD即醫(yī)藥醒”43