熱帶作物學(xué)報(bào)2011,32(2):293-296Chinese Joumal of Tropical Crops錫蘭肉桂無(wú)水乙醇提取物的抑菌活性茍亞峰12,李志剛1,孫世偉1,桑利偉,劉愛(ài)勤121中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所,海南萬(wàn)寧5715332國(guó)家重要熱帶作物工程技術(shù)研究中心,海南儋州571737摘要采用菌絲生長(zhǎng)速率法和組織測(cè)定法,測(cè)定錫蘭肉桂無(wú)水乙醇提取物對(duì)胡椒瘟病菌、香蕉枯萎病菌、芒果炭疽病菌和芒果蒂腐病菌的抑菌活性以及20%錫蘭肉桂微乳劑對(duì)胡椒癌病的保護(hù)作用。結(jié)果表明,錫蘭肉桂無(wú)水乙醇提取物對(duì)胡椒瘟病菌具有較好的抑菌活性,在濃度15mgmL時(shí)抑菌率為9194%,EC為06875mgmL;對(duì)芒果炭疽病菌的抑菌率為63.75%,但對(duì)芒果蒂腐病菌無(wú)抑菌活性。20%錫蘭肉桂微乳劑對(duì)胡椒瘟病表現(xiàn)出較好的保護(hù)效果,當(dāng)稀釋100倍和50倍時(shí)抑制率分別為7279%和7891%。關(guān)鍵詞錫蘭肉桂提取物;胡椒瘟病菌;抑菌活性;保護(hù)效果中圖分類(lèi)號(hào)S4822文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼AStudy the Inhibitory Activity of Cinnamomumzeylanicum Bl Ethanol ExtractionGOU Yafeng, LI Zhigang, SUN Shiwei, SANG Liwei, LIU AiqinI Research Institute of spice and Beverage Crops, CATAS. Wanning Hainan 5715332 State Engineering and Technology Research Center for ImportantTropical Crops Danzhou Hainan 571737Abstrat The article studied inhibition activity of Cinnamomum zeylanicum B1. ethanol extraction against Phytophthoracapsici, Fusarium oxysporum fspcubense, Colletotrichum gloeosporioides and Botryodiplodia theobromae by mycelium growthrate method and in viva. The results indicated that Cinnamomum zeylanicum Bl ethanol extraction had good inhibitoryactivity to Phytophthora capsici. At the concentration of 1.5 mg/mL, the inhibitory rate were 91.949, ECo was 0.6875me/mL, 63.75% to Colletotrichum gloeosporioides but no inhibitory effect to Botryodiplodia theobromae. The protective efficacyof 20% Cinnamomum zeylanicum ME was 72.79% and 78.91% respectively at the concentration of 100x and 50xKey words Cinnamomum zeylanicum B1. extraction; Phytophthora capsici; Inhibitory activity: Protective efficacydoi10.3969jisn.100-2561.201102021錫蘭肉桂( Cinnamomum zeylanicum Bl)為樟菌、香蕉枯萎病菌、芒果炭疽病菌和芒果蒂腐病菌科樟屬植物,在中國(guó)廣東、廣西、海南和臺(tái)灣均有為供試病原菌,測(cè)定錫蘭肉桂無(wú)水乙醇提取物的抑栽培。錫蘭肉桂的桂皮是一種古老的香料,最初發(fā)菌活性及其微乳劑的防治效果,為錫蘭肉桂殺菌劑現(xiàn)在埃及木乃伊的尸體中,其樹(shù)皮具有防腐、健的開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供理論依據(jù)。胃、抗癌、殺菌、殺蟲(chóng)、殺螨等多種活性。陳青口等報(bào)道錫蘭肉桂丙酮提取物對(duì)棉鈴蟲(chóng)和皮氏葉螨具1材料與方法有較強(qiáng)的毒殺作用,并分別對(duì)其體內(nèi)多種解毒代謝11材料酶具有明顯的抑制作用。馮崗等測(cè)定了錫蘭肉桂1!l供試病原菌胡椒癌病菌( (Phytophthora提取物對(duì)集中害螨的殺螨活性,表明錫蘭肉桂葉乙cqpi)由中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所植醇提取物對(duì)朱砂葉螨、皮氏葉螨、比哈小爪螨均有保中心提供;香蕉枯萎病菌( Fusarium oxysporum f.毒殺作用。 egberto等研究發(fā)現(xiàn)錫蘭肉桂精油具有sp. cubense)由中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院?？趯?shí)驗(yàn)站提廣譜的抗菌活性,對(duì)供試曲霉屬菌株A.nigr,A.供;芒果炭疽病菌( Colletotrichum gloeosporioides)mus和A. fumigatus等生長(zhǎng)具有較好的抑菌活性。和芒果蒂腐病菌( Botryodiplodia theobromae)由中國(guó)但目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)錫蘭肉桂提取物的抑菌活性報(bào)道熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護(hù)研究所提供。較少,為進(jìn)一步深入了解錫蘭肉桂提取物的抑菌活112供試植物供試植物錫蘭肉桂葉于200年性,本文以幾種主要熱帶作物上典型病害胡椒瘟病10月采自中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所。收稿日期:201005-12修回日期:20100920基金項(xiàng)目:公益性行業(yè)科研專(zhuān)項(xiàng)(Na.200903024005),海南省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(N.309055資助。作者簡(jiǎn)介:茍亞峰,女,研究實(shí)習(xí)員,研究方向:植物源農(nóng)藥研究開(kāi)發(fā)?！ねㄓ嵶髡?劉愛(ài)勤,E-mail:lang3680@163com。熱帶作物學(xué)報(bào)第32卷12方法1.2.520%錫蘭肉桂微乳劑保護(hù)效果測(cè)定參照12.1錫蘭肉桂無(wú)水乙醇提取物的制備供試植馮俊濤門(mén)方法進(jìn)行。采摘健康、新鮮、葉齡相同的物樣品的前處理和提取均參照馮俊濤等的方法,得胡椒嫩葉(直徑不大于9cm),洗凈放于吸水紙上無(wú)水乙醇提取物浸膏,于冰箱中(04℃)保存?zhèn)溆?。晾?將20%錫蘭內(nèi)桂微乳劑稀釋為50倍和10012.220%錫蘭肉桂微乳劑的制備稱(chēng)取1.2.1中倍,對(duì)照藥劑烯酰·嗎啉WP配制為1000倍和制備的錫蘭肉桂無(wú)水乙醇提取物2g,溶于2g無(wú)2000倍,以及不含有效成分的空白對(duì)照,共5個(gè)水乙醇和甲醇的混合溶液中(無(wú)水乙醇:甲醇=2:處理。先于真葉上施藥,晾干藥液后,用昆蟲(chóng)針1),充分?jǐn)嚢?然后加入乳化劑 Tween-201g,攪在葉子正面等距離的位置刺傷,冉用接種針將3拌均勻后,在高剪切機(jī)的作用下,逐步加入自來(lái)水塊直徑為06cm的胡椒瘟病菌外層菌餅接在相應(yīng)5g,在常溫?cái)嚢枰欢〞r(shí)間后停止,靜置,得20%刺傷處,每皿1片真葉,正面朝上放于培養(yǎng)皿錫蘭肉桂微乳劑。中,然后于人工氣候培養(yǎng)箱(25-28℃)中培養(yǎng)1.2.3抑菌活性測(cè)定采用菌絲生長(zhǎng)速率法。5d后測(cè)量各處理的病斑生長(zhǎng)直徑。按下式計(jì)算保稱(chēng)取03g錫蘭肉桂無(wú)水乙醇提取物浸膏,先用護(hù)效果:1mL無(wú)水乙醇溶解,再用無(wú)菌蒸餾水稀釋制成濃病斑生長(zhǎng)直徑=測(cè)量直徑0.6度為15mymL和6mmL的無(wú)水乙醇提取物。培抑制率=對(duì)對(duì)照病生長(zhǎng)直徑處理病斑生長(zhǎng)直徑養(yǎng)基融化并冷卻至50℃左右,將4mL不同濃度的錫蘭肉桂無(wú)水乙醇提取物分別與36mL瓶的PDA×100%培養(yǎng)基混合,搖勻,迅速倒入3個(gè)直徑為9cm的1.26數(shù)據(jù)分析用 Microsoft Excel軟件進(jìn)行整培養(yǎng)皿中,待其凝固后,取菌落直徑為06cm,培理;經(jīng)DPS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行多元分析;將菌絲生長(zhǎng)養(yǎng)好的各供試病原菌的外層菌塊放置于培養(yǎng)皿中抑制率換成幾率值(y)、藥劑濃度轉(zhuǎn)換成以10為底央,以加入等體積無(wú)水乙醇滅菌水的PDA培養(yǎng)平的對(duì)數(shù)值(x),作毒力回歸直線(xiàn),求出毒力回歸方板為對(duì)照,每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。接種后,在人工氣程(y=a+x)和相關(guān)系數(shù)(r),計(jì)算抑制中濃度候培養(yǎng)箱(25-28℃)下培養(yǎng)5d后,采用十字交叉(ECx)法分別測(cè)量菌落直徑,求其平均值,按下式計(jì)算抑菌率。2結(jié)果與分析菌落直徑=測(cè)量菌落直徑平均值-0.62.1錫蘭肉桂無(wú)水乙醇提取物對(duì)供試病原菌的抑抑菌率=對(duì)照菌落直徑處理菌落直徑×100%菌活性對(duì)照菌落直徑采用冷浸的方法制備錫蘭肉桂無(wú)水乙醇提取物1.244室內(nèi)抑菌每力(EC)測(cè)定將123中篩選浸膏的提取率為2483%。從表1可見(jiàn),不同濃度出抑菌活性較好的病原菌作為供試病原菌,測(cè)定的錫蘭肉桂無(wú)水乙醇提取物對(duì)各供試病原菌菌絲生錫蘭肉桂無(wú)水乙醇提取物對(duì)其離體抑菌毒力。將長(zhǎng)具有不同程度的抑菌活性。當(dāng)錫蘭肉桂無(wú)水乙醇錫蘭肉桂無(wú)水乙醇提取物分別稀釋為20、1.5、提取物質(zhì)量濃度為15mg千樣/mL時(shí),對(duì)胡椒癌病1.0、06、03mg/mL的濃度,按一定比例加入到融菌表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制活性,抑菌率9194%;對(duì)芒化好的PDA培養(yǎng)基中,參照12.3的方法測(cè)定,每果炭疽病菌也具有一定的抑菌活性,抑菌率為處理重復(fù)3次,用最小二乘法計(jì)算毒力回歸方程及6375%;對(duì)香蕉枯委病菌抑菌活性較差,僅為抑制中濃度(EC)。4103%;對(duì)芒果蒂腐病菌無(wú)抑制作用。表1蘭肉桂無(wú)水乙醇提取物對(duì)供試病原菌的抑菌率測(cè)定結(jié)果5mgmL濃度處理06mg/mL濃度處理供試試病原菌平均菌落直徑/cm抑菌率%平均菌落直徑/cm抑菌率/%胡椒瘟病菌( P, capsici)9194±00842a40.32±1.8957a香蕉枯菱病菌(F. oxysporum)4103±05221c芒果炭疽病畫(huà)( C. doeasporioides)63.7503566b3.321708±0.84l5ab芒果蒂腐病菌(B. theobromae)說(shuō)明:“”表示提取物對(duì)芒果蒂?gòu)V病菌菌絲生長(zhǎng)無(wú)抑菌活性;菌落直徑指的是3次重復(fù)的平均值;數(shù)宇后字母相同表示無(wú)顯著差異,不同表示差異達(dá)顯著水平。下同。第2期茍亞峰等:錫蘭肉桂無(wú)水乙醇提取物的抑菌活性295-22錫蘭肉桂無(wú)水乙醇提取物對(duì)胡椒瘟病菌的室瘟病菌表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑菌活性,進(jìn)一步測(cè)定不同濃內(nèi)抑菌毒力度的錫蘭肉桂無(wú)水乙醇提取物對(duì)胡椒瘟病菌菌絲生從表1可見(jiàn),錫蘭肉桂無(wú)水乙醇提取物對(duì)胡椒長(zhǎng)的室內(nèi)抑菌毒力(ECs),結(jié)果見(jiàn)表2。豪2錫蘭肉桂無(wú)水乙醇提取物對(duì)胡橄瘟病菌菌絲生長(zhǎng)的室內(nèi)抑菌毒力測(cè)定結(jié)果供試藥劑供試濃度{mg/m)抑菌率/%毒力回歸方程(=ax+b)相關(guān)系數(shù)()ECy(mgmL)98.39a錫蘭肉桂無(wú)水8548乙醇提取物75.27ay4lx666130975045.70b0645c2320%錫蘭肉桂微乳劑對(duì)胡椒瘟病的保護(hù)效果劑稀釋50倍和100倍時(shí),防效分別為7891%和結(jié)果表明,20%錫蘭肉桂微乳劑對(duì)胡椒瘟病的1279%;對(duì)照藥劑烯酰,嗎啉WP稀釋1000倍和保護(hù)效果明顯低于化學(xué)殺菌劑烯?！徇鳺P,但2000倍時(shí)防效分別為100%和9196%,見(jiàn)表3。也表現(xiàn)出較強(qiáng)的保護(hù)效果。當(dāng)20%錫蘭肉桂微乳豪3鋸蘭肉桂無(wú)水乙醇提取物對(duì)胡橄瘟病的防效測(cè)定結(jié)果稀釋50倍稀釋100倍供試藥劑平均菌落貞徑/cm防效(%平均菌落直徑/cm防效/%%錫蘭肉桂ME0.517烯酰嗎啉WP02179116CK2452.4503討論外,還有幾種黃酮類(lèi)化合物。由于生物堿類(lèi)、萜本研究結(jié)果表明,錫蘭肉桂無(wú)水乙醇提取物對(duì)類(lèi)、黃酮類(lèi)、香豆素、木脂素、甾類(lèi)及精油類(lèi)等化胡椒瘟病菌具有較好的抑菌活性,抑菌率達(dá)合物叫都是主要的植物源殺菌劑有效成分,因此9194%;對(duì)芒果炭疽病菌的抑菌活性一般,抑菌錫蘭肉桂中具體的抑菌活性成分還有待進(jìn)一步研率為6375%;對(duì)芒果蒂腐病菌無(wú)抑菌活性。有研究?；钚猿煞值拇_定對(duì)該物質(zhì)的殺菌機(jī)理具有重要究發(fā)現(xiàn)肉桂丙酮提取物在20mgm的濃度下,對(duì)意義。芒果采后的2種病原菌的抑菌率可達(dá)100%,具有參考文獻(xiàn)較好的抑菌活性,這與本試驗(yàn)結(jié)果有相似之處。凹陳青,軍麗金櫪衛(wèi)帆,等鎘蘭肉桂丙酮提取物對(duì)棉鈴蟲(chóng)的毒由組織法試驗(yàn)結(jié)果表明,20%錫蘭肉桂微乳劑的保力及其代謝酶活性的影響農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào),2004,61):11-15護(hù)效果低于化學(xué)藥劑烯?！徇鳺P,但治療效果四陳青,櫪旦帆,覃麗金,等鎘蘭肉桂丙酬提取物對(duì)皮氏葉蝴的有待進(jìn)一步研究。由于該微乳劑為植物源殺菌劑毒力及其代謝酶活性的影啊中國(guó)生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2005,13(4):對(duì)環(huán)境污染小,對(duì)作物靶標(biāo)安全,不易產(chǎn)生抗藥性29-31等優(yōu)點(diǎn),因此,具有進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用的潛能13]馮崗,張靜.曲曉,等錫蘭肉桂的殺蜻活性及有效成分門(mén)熱帶作物學(xué)報(bào),2010,31(3):474479目前,有關(guān)錫蘭肉桂殺蟲(chóng)、防腐、抗癌活性等[4]Egberto Santos carmo, Edeltrudes de Oliveira, Evandro Leite方面的研究很多。 Jayaprakasha等研究表明錫蘭肉Efet o Cinnamon Zeylanicum Blume桂果實(shí)提取物可作為抗氧化劑和抗誘變劑應(yīng)用于食essential oilth and morphogenesis of some品生產(chǎn)中;Fich等分別在離體和活體條件下測(cè)定potentially pathogenic Aspergillus species []. Brazillian Joumal了錫蘭肉桂葉精油的殺螨活性,發(fā)現(xiàn)在離體條件of Microbiology, 2008, 39: 91-97.下,當(dāng)錫蘭肉桂葉精油的濃度在0.16%-10%時(shí)對(duì)1S]馮俊讒,石勇強(qiáng),張興.56種植物抑菌活性篩選試驗(yàn)門(mén)西農(nóng)林科技大學(xué)(自然科學(xué)版),兔癢螨具有較好的殺螨活性,但對(duì)具體的殺螨活性6]方中達(dá).植病研究方法M北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,198成分未見(jiàn)研究報(bào)道。有報(bào)道錫蘭肉桂中除了含有抗7慕立義植物化學(xué)保護(hù)研究方法圍M北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,PAF活性的丁香酚、大豆腦背I、山奈酚等化合物1994:7981熱帶作物學(xué)報(bào)第32卷8]高兆銀,胡美姣,李敏,等.中草藥提取物對(duì)2種杜果采后for in vitro control of Colletotrichum loeosporioide, causal agent病原菌的抑菌活性熱帶作物學(xué)報(bào),2008,29(1):83-88of anthracnose disease in tropical fruits IJI Pest Manag Sc[9)JayaprakashaG K Negi P S, Jena B S, et al. Antioxidant and2003,59:1245-124xtracts[J]. Joumal of Food Composition and Analysis, 2007.20330-336[lO] Ichi G. Flamini G. Zaralli L J, et al. Efficacy of an essentialoil of Cinnanomu zeylanicum against Psoroptes cuniculi U].Phytomedicine,2007,14(23):227-231[11] Almada Ruiz E, Martinez Tellez M A, Hem ndez Alamo MM.et al. Fungicidal potential of methoxylated flavones from citrus責(zé)任編輯:高靜