口腔護理用品工業(yè)第二十四卷笫三冊6ORAL CARE INDUSTRY014年6月研究報告蓽茇乙醇提取物在牙膏中的防齲應(yīng)用許海燕(江西誠志日化有限公司南昌30013)摘要∷本草綱目》記載蓽茇具有治療牙痛之功效。研究了蓽茇乙醇提取物在牙膏中的應(yīng)用,介紹了蓽茇中胡椒堿的提取方法、牙膏中有效成分胡椒堿的檢測,并用抑制變形鏈球菌的替代實驗法進行了防齲測試,初步證明蓽茇乙醇提取物在牙膏中作為防齲劑是可行的關(guān)鍵詞:蓽茇提取物方法胡椒堿的檢測防齲抑菌率前言油、胡椒堿的抗菌、抗驚厥、擴張心血管等應(yīng)用上,本研究主要是關(guān)于蓽茇乙醇提取物在牙膏上的應(yīng)用,齲齒是以牙體被蛀蝕,逐漸毀壞而成齲洞為主其主要功效成分為胡椒堿。要表現(xiàn)的牙病,是人類發(fā)病率極高的疾病。我國2005年第三次口腔健康流行調(diào)查顯示:每一百個51蓽茇中功效成分胡椒堿的提取歲兒童中就有超過66人嘴里有齲齒,35~44歲中蓽茇不同提取工藝得到不同的化學成分,蓽茇年人群中,這一比例上升到881%,而65~74歲老乙醇提取物中含有10個化合物,主要為胡椒堿年人的患齲率則高達98.4%。世界衛(wèi)生組織已將 methyl piperate、幾內(nèi)亞胡椒堿、苯丙酸等。有文獻齲齒與腫瘤、心血管疾病并列為人類三大重點防治顯示胡椒堿有止痛、消炎、抗?jié)兊淖饔?1。關(guān)于疾病。作為日用品的牙膏,必須考慮其預防齲齒的胃潰瘍的中藥應(yīng)用中就有蓽茇乙醇提取物的應(yīng)用研功能,氟化物的抗齲能力已得到世界公認,但是還是究。有不少人擔心不正確使用氟化物牙膏會導致氟中毒胡椒堿是桂皮酰胺類生物堿物質(zhì),有親脂性,在或者氟斑牙等不良后果,中藥防齲是近年來牙膏應(yīng)水中的溶解度很小,在醇和石油醚中溶解度較大。用中研究較多的課題。作為口腔用品,考慮其安全性,選擇用乙醇作為提取蓽茇,為胡椒科植物蓽茇 Piperlongum-的干燥溶劑,采用醇提水沉的方法。提取方法借鑒了胡椒近成熟或成熟果穗,英文名: FRUCTUS PIPERIS中提取胡椒堿的方法3),具體見圖1。LONGI。在中國古代就認為有防齲齒的應(yīng)用,《本草粉碎茇果實團o日蓽茇粉綱目》記為:“蓽茇,為頭痛、鼻淵、牙痛要藥,取其辛0倍75%乙醇80℃蒸餾0.5小時,濾過熱能入陽明經(jīng)散浮熱也”,《本草便讀》:“蓽茇,大辛□濾液大熱,味類胡椒,入胃與大腸,陽明藥也。溫中散寒,倍水浸泡冷藏48小時,過濾破滯氣,開郁結(jié),下氣除痰,又能散上焦之浮熱,凡一切牙痛、頭風、吞酸等癥,屬于陽明濕火者,皆可用此加熱濃縮以治之”。在2010版《藥典》中對于蓽茇的功能與發(fā)提取物(主含胡椒堿)圖主治也有外治牙痛的描述,使用方法是“研末塞齲齒孔中”。2蓽茇乙醇提取物在牙膏配方中的應(yīng)用蓽茇在烹調(diào)用途中常用作調(diào)味品,有矯味增香蓽茇乙醇提取物中的有效成分胡椒堿,在堿性作用,多用于燒、烤、燴等菜肴,也是鹵味香料之其果實主要成分含胡椒堿( Piperine)、蓽茇酰胺條件下會水解成胡椒酸,故不考慮用方解石體系的牙膏配方。將蓽茇醇提物加人穩(wěn)定的二氧化硅牙膏2014年第3期許海燕:蓽茇乙醇提取物在牙膏中的防齲應(yīng)用月的高溫老化試驗,產(chǎn)品各項理化指標、胡椒堿含量式中與常溫樣品沒有明顯區(qū)別。經(jīng)過實驗研究,提取物由標準曲線查出試樣溶液中胡椒堿的濃中有效成分加入量在50~200pm不影響牙膏穩(wěn)定度,單位微克每毫升(μg/mL)性,但是50pm加入量就明顯表現(xiàn)出作用功效。有V-—分散樣品用容量瓶體積,單位為毫升代表性的牙膏配方如表1。(mL)表1蓽茇牙膏配方試樣質(zhì)量,單位為克(g)原料名稱表牙膏中胡椒堿含量測試結(jié)果氧化硅18-22月桂醇硫酸酯鈉5-3牙北號2123測試結(jié)果2013.3測試結(jié)果說明含量mm)含量(pm)山梨醇70.922012065-B比201205增羧甲基纖維素鈉0.52120305-B70.0769.5加自然光照5小時后灌裝456789羥丙基瓜爾膠0.3-0.62012030871.3571.020120308-B比2012008增蓽茇提取物以胡椒堿計)0.005-0.20120308-B70.l加自然光眼5小時后灌裝。糖精鈉0.2-0.3薄荷香精1.0-1.5針對胡椒堿可能光解的特點我們做了分析,單尼泊金酯0.05-0.2余量純胡椒堿光分解率是不高的。莫崢嶸進行了自然光照5小時的分解實驗4,用可見分光光度法測定胡椒堿的濃度,隨著光照時間延長吸光度是下降的,但3蓽茇乙醇提取有效成分胡椒堿的檢測是5小時光照后吸光度只下降1.3%。這一分析結(jié)通過對牙膏中胡椒堿的檢出,確定其在牙膏中果與我們對成品檢測結(jié)果是相近的。是穩(wěn)定存在的4蓽茇提取物的防齲效果實驗室驗證檢測原理:將牙膏用甲醇溶解,然后過濾處理,取清液用帶紫外檢測器的高效液相色譜儀分析測口腔齲病主要致病菌為變形鏈球菌,防齲和抗定,通過峰面積外標法定量計算。齲需要進行抗菌治療。實驗室通過比較牙膏對變形精密稱取胡椒堿對照品5mg,置于50mL容量鏈球菌的抑菌試驗,間接驗證防齲作用。瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,精密吸取次溶液實驗方法:將蓽茇提取物原液對變形鏈球菌進0.1,0.2,0.3,0.4,0.6,0.8,1.0mL分別置于10mL行抑菌試驗,有效率達90%以上。根據(jù)這個依據(jù)將容量瓶中,甲醇稀釋并定容至刻度。按上述色譜條原液配成牙膏,用含0.15%氟的含氟牙膏作對照,件進樣10uL,測定峰面積,以峰面積積分值為縱坐觀察含蓽茇提取物的蓽茇牙膏對變形鏈球菌的直接標,對照品進樣量為橫坐標,繪制標準曲線,計算回抑菌作用。將牙膏配成20%的水溶液,取其浸出液歸方程:Y=71.867X-2.4855,r=0.998。結(jié)果表的作為試樣進行抑菌試驗。檢測其抑菌率。明,胡椒堿在0.01~0.1ug,含量與其峰面積積分值操作步驟:將試驗菌24h斜面培養(yǎng)物用PBS洗呈良好線性關(guān)系。下,制成菌懸液要求的濃度為:用100uL滴于5mL牙膏中胡椒堿的測定:稱取牙膏1g(精確至對照樣液內(nèi),回收菌數(shù)為1×102-9×104cfu/mL)0.0001g)置于小碾缽內(nèi),加入少許70%甲醇碾磨,取被試樣液(5mL)和對照樣液(要求與試樣同使膏體完全分散均勻,再轉(zhuǎn)入50ml量瓶中,用70%質(zhì)材料,同等大小,但不含抗菌材料,且經(jīng)滅菌處甲醇稀釋至刻度,搖勻,置于高速離心機,300理)各4管。取上述菌懸液,分別在每個被試樣液min5分鐘后取上清液再用0.45m濾膜過濾,濾液和對照樣液內(nèi)滴加100uL,均勻混合,開始計時,作作為樣品溶液。檢測時準確吸取10μL樣品溶液,用10mn,用無菌鑷分別將樣液(0.5ml)投人含注入液相色譜儀測定其峰面積,由標準曲線查出試5 mLPBs的試管內(nèi),充分混勻,作適當稀釋,然后取樣溶液中胡椒堿的濃度。其中2~3個稀釋度,分別吸取0.5mL,置于兩個平結(jié)果計算:皿,用MS培養(yǎng)基15mL作傾注,轉(zhuǎn)動平皿,使其充分按式(1川計算樣品中胡椒堿含量(X)均勻,瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平板,37℃厭氧培養(yǎng),培養(yǎng)條午海燕:蓽茇乙醇提取物在牙膏中的防齲應(yīng)用2014年第3期試驗重復3次,按式(2)計算抑菌率:按照《消毒技術(shù)規(guī)范》的抑菌率評價標準:抑菌X=(A-B)A×100%…………(2)率≥50%~90%,產(chǎn)品有抑菌作用;抑菌率≥90%,式中:X—抑菌率,%;產(chǎn)品有較強抑菌作用。從表3的分析結(jié)果反應(yīng)出:A——對照樣品平均菌落數(shù);含氟牙膏和含蓽茇提取物的牙膏對變鏈菌均有較強B——被試樣品平均菌落數(shù)。的抑菌效果抑菌率試驗分析結(jié)果樣品濃度與對照組存活菌試驗組存活菌測試微生物膏樣品序號抑菌率%)處理時間cfu/mL)(cfu/mL)l.3×1020%變異鏈球菌含蓽茇提取物牙膏21.4×10499.92牙膏上清液( Streptococcus mutans)99.921.3×10410>99.921分鐘ATCC700610含0.15%氟牙膏1.4×104>99.921.2×104表4FAO/WO聯(lián)合專家委員會對食品添加劑進行評估總結(jié)5蓽茇及其提取物的安全性COE編衛(wèi)生部公布《關(guān)于進一步規(guī)范保健食品原料管FMA編號為:290理的通知》中,明確蓽茇屬于“可用于保健食品的物JCFA號l6001-(5-(3,4-亞甲二氧苯基)-1-氧代品”。按按照《香辛料和調(diào)味品(GB/T12729.1-化學名稱:2,4-皮二烯基)哌啶2008)》蓽茇作為可食用的香辛料。PIPEROYLPIPERIDINE鄭敏等對蓽菱進行了不同劑量的毒理研究5),最新評價:物可接受通過設(shè)定陰性對照組、陽性對照組、600mg/kg·d高評論當用作調(diào)味劑的攝入量在目前的水平無安全問題劑量組300mg/kg·d中劑量組、150mg/kg·d低劑報告:IRS934- JECFA89分之65產(chǎn)品規(guī)格與本補遺13HNP52地址。68分之13量組分別觀察對 wistar孕鼠的影響。結(jié)果表明,高、F:FAS按 JECFA6中劑量組對哺乳動物的生殖細胞有極大的損傷作用,且隨劑量增加損傷加重。6結(jié)果與討論針對蓽茇提取胡椒堿致畸研究表明η,通過對含蓽茇乙醇提取物的牙膏對變形鏈球菌的抑菌wiar孕鼠的影響觀察,胡椒堿不同使用濃度有差率與含氟牙膏相比,其抑菌率相當,間接證明其具有異,287.04mg/kg:d高劑量組和71.76mg/kg·d中一定的防齲作用。中藥防齲作為將來代替氟化物防劑量組孕鼠體重增加、胎鼠生長指標緩慢或下降,齲具有使用安全,用戶容易接受的特點。但是實驗17.94rg/kg·d低劑量組沒有顯著影響。不論高中室驗證方法目前與口腔真實的使用環(huán)境有一定差低劑量對胎鼠外觀、骨骼和內(nèi)臟均無顯著影響。異,需要進一步進行臨床效果驗證。從目前的應(yīng)用從對蓽茇和胡椒堿的毒理研究可見,牙膏配方效果來看,作為一種新的開發(fā)思路和開發(fā)方向,蓽茇需要將胡椒堿使用濃度控制在低劑量范圍內(nèi),若以可作為新的防齲劑進行深入研究。17.94mg/kg·d為安全劑量,則50kg體重的成人每參考文獻日的安全劑量為897mg。遠遠大于在牙膏中的有效2期,總第39卷[1吳霞,于志斌.《蓽茇化學成分的研究》.中草藥,2008年第添加量[2]呼日樂巴根.《胡椒堿的藥理作用研究概況》.中國民族醫(yī)依據(jù)《食品安全性毒理學評價程序與方法藥雜志,2009年第2期(GB15193-1994)》中對香料的規(guī)定,“如果FAO雜志,第28卷第5期[3]劉文,孫宇章.《胡椒中胡椒堿的提取工藝研究》.中國中藥WHO已有安全規(guī)定的,在進行急性毒性試驗后,參4]莫崢嶸,張歧.《胡椒堿的抗氧化活性及穩(wěn)定性硏究》.海南師學院學報,2006年3月,第19卷第1期照規(guī)定進行評價”。從表4中FAO/WHO聯(lián)合專[5]鄭敏,李文研.《蓽茇致突變毒理研究》.內(nèi)蒙古醫(yī)學院學家委員會對食品添加劑胡椒堿進行的評估總結(jié)可報,2012年4月第34卷第2期6]孫富友,樊菊芬.《蓽茇揮發(fā)油化學成分的研究XJ]中醫(yī)見,胡椒堿是安全的。胡椒堿的急性毒性數(shù)據(jù):大鼠雜志,1981,(12):65-6.6.7]海英,那生桑,雙福.《蓽茇