第12卷第1期中國實驗方劑學(xué)雜志Vol. 12,No.12006年1月Chinese Jourmal of Experimental Traditional Medical FormulaeJan. ,2006地黃提取工藝的優(yōu)化宋子榮'* ,譚梓駿”,陳西松’,白海波'(1.江西中醫(yī)學(xué)院,江西南昌330006; 2. 浙江養(yǎng)生堂藥物研究所,浙江杭州~ 310007;3.浙江中醫(yī)學(xué)院,浙江杭州310053)[摘要]目的 :研兗地黃中有效成分梓醇以及地黃抗氧化能力的最佳提取條件。方法:以HPLC為含量測定方法,采用重復(fù)正交實驗法,以乙醇濃度(A)、溶劑量(B)、提取時間(C)和提取次數(shù)(D)4個因素,每個因素選取3個水平進(jìn)行實驗,同時利用化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行體外抗氧化能力研究,最后確定提取工藝。結(jié)果:因素A.B、C、D對梓醇的含量均有顯著影響。其抗氧化能.力以醇提2次為佳。結(jié)論:60%乙醇8倍量,回流提取2次,每次1.5h為梓醇及地黃抗氧化能力的較佳提取條件。[關(guān)鍵詞]地黃;梓醇 ;正交實驗;抗氧化能力;HPLC;化學(xué)發(fā)光法[中圖分類號] R283.6[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 105-9302006010008-02地黃為玄參科植物Rehma,nnia glutinosa Libosch.作,注入發(fā)光儀進(jìn)行測定,以Ve為對照品進(jìn)行計算。的塊莖,其化學(xué)成分研究表明,有效成分含有梓醇等3結(jié)果環(huán)烯醚萜甙類，極性較大,為更好發(fā)揮地黃的藥用功3.1梓醇為指標(biāo)效,本研究以梓醇為檢測指標(biāo),采用HPLC方法,考3.1.1提取溶劑的確定 取10g地黃藥材兩份,一察了提取溶媒、提取方法、提取次數(shù)和溶媒用量等因份用10倍水提取1h,提取4次,每次100mL 定容;素,同時采用化學(xué)發(fā)光法,以地黃抗氧化能力為指標(biāo)- 份用10倍70%乙醇提取1小時，提取4次,每次對提取條件進(jìn)行探討,確定了最佳工藝條件。100mL定容,10倍稀釋后HPLC法測定梓醇含量。1儀器與試劑檢測結(jié)果:水提得率為1.28%, 第一次提取出66%，Angilent1100高效液相色譜儀，DAD檢測器;70%乙醇提取得率為1.96%,第一次提取出75%。Photochem發(fā)光儀(德耶拿儀器公司),梓醇(0808~所 以選擇醇提法提取,梓醇提取得率更高。9803,中國藥品生物制品檢定所);乙腈(色譜純);化3.1.2正交實驗設(shè)計及結(jié)果 為確定 地黃醇提的學(xué)發(fā)光試劑盒(德耶拿儀器公司);地黃藥材(華東醫(yī)提取工藝，以梓醇為指標(biāo),采用L,(3^ )正交實驗進(jìn)行藥股份有限公司)經(jīng)鑒定為玄參科植物地黃優(yōu)選,正交因素,水平見表1。Rehmannia glutinosa Libosch. 的塊莖。表1正交試驗因素 、冰平裹2實驗方法因素2.1梓醇含量測定 采用 HPLC法測定,色譜柱為4.6x 150mm C18;流動相為乙腈-水(2:98);檢測波乙醇依度(%)溶劑量(倍)提取時間(h) 提取次數(shù)(次)長212nm;柱溫28C;流量0.6mL/min;經(jīng)方法學(xué)考0.5察合格,回歸方程為Y = 0.0002X - 0.0016, r =21.50.9999。(Y:濃度,X:峰面積)2.2地黃抗氧化能力測定 地黃 提取液(0.1g生藥提取工藝過程為稱取地黃10g左右,以不同濃/mL)作1:50稀釋,精密吸取20puL,按試劑盒說明操度中國煤化工,分別按L,(3* )正交MHCNMHG液,加水稀釋定容至1000mL,得1 ~9號樣品液,做2次重復(fù)。精密量取[收稿日期] 204-11-.10[遁訊作者]宋子榮 , (0571)86669211上述樣品溶液1mL,高速離心,注入色譜儀進(jìn)行測●8..第12卷第1期中國實驗方劑學(xué)雜志Vol.12,No. 12006年1月Chinese Jounal of Experimneatal Traditional Medical ForoulaeJan. ,2006定,以外標(biāo)法計算梓醇含量。計算結(jié)果及方差分析3.2地黃抗氧化能力為指標(biāo) 地黃醇提 、水提工藝見表2,表3。在抗氧化能力方面是否有差別，對此進(jìn)行了研究。由表3、表4可見，以地黃梓醇提取量為指標(biāo),則精密稱取地黃10g,分別以80mL60%乙醇和水為溶以A,B,CD,,即60%的乙醇溶液8倍量提取2次,每劑,平行操作條件下，回流提取2次,每次1.5h。醇次1.5h為較佳方案。提液60減壓回收乙醇,以水稀釋定容100mL,得樣表2關(guān)于地黃藥材梓醉提取的正交實驗表品液,測定樣品液抗氧化能力,各做6個樣本,結(jié)果試驗號B梓醇含量(%)見表4。0.489 0.5220.633 0.6584討論0.544 0.468有文獻(xiàn)以薄層掃描法測定梓醇,考察了水提10.613 0.487~5h和95%醇提2~4h梓醇含量,認(rèn)為地黃水提10.652 0.728~ 2h為宜",劉明等以HPLC測定梓醇,通過正交試0.729 0.654驗表明甲醇3倍量,加熱回流提取2次,為梓醇較佳0.806 0.802提取條件(2]。本實驗采用有重復(fù)的正交實驗,以梓0.295 0. 3010.569 0. 549醇和抗氧化能力為指標(biāo),評價了地黃提取工藝,在選3.314 3.719 2.990 3. 509定的條件下,梓醇和抗氧化能力均達(dá)到理想效果,因[3.863 3.267 3.509 4 .282此,結(jié)果較為可靠,為工業(yè)生產(chǎn)提供有意義的參考。3..322 3.513 4.000 2.708為了考察梓醇的熱穩(wěn)定性,做了60%乙醇連續(xù)(I2+ U2+ m2)/9-CT 0.033 0.017 0.0B5 0.2068h提取的實驗,在0.5.1.5.3.5.8h提取液中梓醇的離均差平方和含量逐漸上升,未見有下降。在濃縮于燥時發(fā)現(xiàn),誤差平方和0.0176105C烘于和60C真空烘于對樣品中梓醇的含量影褒3影響地黃藥材梓醇提取因囊的方整分析響較大。105氣烘干后,梓醇的含量降為原來的來源離均差平方和自 由度方差F值顯著性0.0330.01658.435p<0.0t10% ;60C真空烘干,梓醇的含量為原來的90%。表.0.00854.362P< 0.05明梓醇在溶劑中提取時比較穩(wěn)定,但是在依縮干燥0.0850.042521.729P<0.0I時需注意,溫度不宜過高。.0.2060.103252. 764P<0.01誤差0.01760.0019 .[參考文獻(xiàn)]查方差分析表,Fo.oua.0) = 8.06, F.or2.0 =4.26表4地黃藥材抗氧化能力實驗結(jié)果(&xs)[1] 張玲,徐新剛,時延增, 等.地黃提取工藝研究[J].中草提取次敷醇提(ma)木提(mol)顯蓍性(T-test)藥,1998 ,29(5) :308-310.第一次1.453 +0.3831.075 +0.137P <0.05[2] 劉明, 李更生.鮮地黃中梓醇提取工藝[].時珍國醫(yī)國第二次0.707 * 0.2380.585士0.078P>0.05藥,00011<4):301-302.中國中醫(yī)研究院更名為中國中國煤化工2005年11月19日,中國中醫(yī)研究院成立50周年暨更名中國中醫(yī)科YHCNMHG堂隆重舉行。中共中央政治局委員、國務(wù)院副總理吳儀到會祝賀并作重要講話。曹洪欣院長在以時中說,中國十達(dá)研尤既史名為中國中醫(yī)科學(xué)院是幾代中國中醫(yī)研究院人乃至中醫(yī)藥人的夙愿.也是提高中醫(yī)科學(xué)地位的重大舉措,充分體現(xiàn)了黨和政府對中醫(yī)藥發(fā)展的高度重視。(秦秋)