第26卷第4期Vol. 26,No.4F 00D&MACHINERY2010年7月July，20 1010. 3969/J isn 1003一5788.2010 04. 020面粉增筋劑聚丙烯酸鈉中聚丙烯酰胺的測(cè)定Determination of polyacrylamide in sodium polyacrylate in flour gluten fortifier黃紅霞HUANG Hong-tia(福建省中心檢驗(yàn)所，福建福州350002)(Fujian Provincial Central Inspection Institute, Fuzhou, Fujian 350002, China)摘要:研究建立熒光衍生劑氯甲酸芴甲酯(FM0C-CI)柱前衍的面團(tuán),表面光滑而具有光澤;②形成穩(wěn)定的面團(tuán)膠體，防止生,高效液相色譜熒光檢測(cè)器檢測(cè)面粉增筋劑聚丙烯酸鈉中可溶性淀粉滲出;③增加產(chǎn)品的保水性,使水分均勻保持于聚丙烯酰胺的檢測(cè)方法。樣品經(jīng)水提取,在弱堿性條件下通面團(tuán)中,防止干燥;④提高面團(tuán)的延展性;⑤使原料中的油脂過(guò)FMOC-CI衍生,經(jīng)二醇基柱分離,并以熒光檢測(cè)器測(cè)定。成分穩(wěn)定地分散至面團(tuán)中,制作以小麥粉、紅薯、玉米、燕麥、.結(jié)果表明:該方法聚丙烯酰胺檢測(cè)限為0.2 g/kg;樣品回收馬鈴薯等為原料的鹵條、粉絲、粉條、粉皮時(shí),可提高產(chǎn)晶品的率為85. 5%~90.9% ,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為3. 1%~4.7%筋力,增強(qiáng)耐煮性[1-8]。(n=6),在4.28~428 μg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，線性回歸系數(shù)r大于0. 999.聚丙烯酰胺簡(jiǎn)稱PAM,由丙烯酰胺單體聚合而成,是- -關(guān)鍵詞:柱前衍生;高效液相色譜熒光法;聚丙烯酸鈉;聚丙種水溶性線型高分子物質(zhì)。主要用作絮凝劑,用于石油工烯酰胺業(yè).紡織工業(yè)、造紙工業(yè)等[3-1。聚丙烯酰胺常含有丙烯酰.胺單體,丙烯酰胺具神經(jīng)毒作用,可引起疲嗜睡.手指麻木，with FLD detection of polyacrylamide(PAM) in sodium polyacrylate位置性震顫，步態(tài)紊亂,肌肉萎編,肌肉尤力,手出汗脫屑以(PAANa), The flour gluten forifier-PAANa samples were extractedby water and pre column derivarization with FM0C-C. HPIC sepa-及接觸性皮炎等凹,屬中等毒類,具有生殖毒性、致突變性、ration was performed on YMC-Pack Diol-300 column (8. 0 X致癌性。因此,中國(guó)明確規(guī)定聚丙烯酰胺不允許作為食品添300 mm.5 μm) and the fluorescence detection was used. Conclu-加劑使用(6)。但由于聚內(nèi)烯酰胺具有比聚丙烯酸鈉更好的.sion; The detection limit was about 0. 2 g/kg . The recoveries增筋效果,一些不法廠家為S使自己的產(chǎn)品更好銷售,不顧ranged from 85. 5% to 90. 9%，and the relative standard deviationswere3.1%~4.7% (n- 6). The linear range was 4. 28μg/mL ~國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定違規(guī)使用聚丙烯酰胺來(lái)代替聚丙烯酸鈉。428 ug/mI, and the correlation coefficient (R) was over 0. 999.目前,檢測(cè)聚丙烯酰胺的方法有溴氧化一可見(jiàn)光譜法[]、凝Keywords: pre column derivaization; HPLC-fluorescence detection;膠色譜分析方法0等。但溴氧化-可見(jiàn)光譜法測(cè)試的干擾sodium polyacrylate; polyacrylamide因素多、步驟繁瑣、測(cè)試精確度低、應(yīng)用范圍窄,由于聚丙烯面粉增筋劑是一類與蛋白質(zhì)(面筋)聯(lián)結(jié)以改進(jìn)面粉制酰胺和聚內(nèi)烯酸鈉的部分分子最有交叉,采用凝膠色譜分析品品質(zhì)的添加劑,包括改進(jìn)面筋的機(jī)械加工性能、氣體保留方法也難以分離鑒定。性能及血制品的體積.勻稱性.組織結(jié)構(gòu)和顆粒等。主要由本試驗(yàn)通過(guò)熒光街生劑氯甲酸芴甲酯(FM0C-CI)柱前聚丙烯酸鈉、偶氨甲酰胺、活性磷酸鹽、變性淀粉等原料衍生，高效液相色譜熒光檢測(cè)器檢測(cè),建立了面粉增筋劑聚丙烯酸鈉中聚丙烯酰胺含量的測(cè)定方法。該方法抗干擾性制成。驟丙烯酸鈉簡(jiǎn)稱PAANa,是一種水溶性樹脂,分子最數(shù)強(qiáng),重現(xiàn)性好,靈敏度商,為產(chǎn)品質(zhì)量執(zhí)法與檢驗(yàn)提供了技術(shù)百萬(wàn),無(wú)色或淡黃色粘稠液體,在面制食品中作為增筋劑有方法和依據(jù)。如下功效:①增強(qiáng)原料面粉中的蛋白質(zhì)黏結(jié)力,使淀粉粒子中國(guó)煤化工相互結(jié)合,分散滲透至蛋白質(zhì)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中,形成質(zhì)地致密1.11HCNMHG高效液相色譜儀Alliance" 2695(配2475熒光檢測(cè)器)，作者簡(jiǎn)介:黃紅霞(1965 - ),女,福建省中心檢驗(yàn)所高級(jí)工程師。美國(guó)沃特世公司;E-mil.hy@fei. net收稿日期:2010-02- 20電子分析天平:BT 224S,德國(guó)賽多利斯;73安全與檢測(cè)2010年第4期渦旋混勻器:XH-B型,江蘇康鍵醫(yī)療用品有限公司;FMOC-CI的術(shù)生化條件"]和Waters公川氦基酸的accq-tag高速離心機(jī):TGL-16B,上海安亭科學(xué)儀器廠:街生化條件[1]對(duì)聚丙烯酰胺術(shù)生后進(jìn)行檢測(cè)。分別采用試驗(yàn)用水:MilliQAcademic超純水發(fā)生器制備的超Crn色譜柱.TSK, G4000PW凝膠色譜柱和YMC-Pack Diol純水;二醇基柱來(lái)分離兩種衍生刪的衍生產(chǎn)物，結(jié)果只有采用乙腈:色譜純,山東禹王;FMOC-CI術(shù)生的產(chǎn)物能通過(guò)YMC-Pack Diol 二醇基柱來(lái)有硼砂:分析純,國(guó)藥集團(tuán);效分離。采用YMC-Pack Diol-300,5 μm,300X8.0 mm LD二氯甲烷;分析純,國(guó)藥集團(tuán);色譜柱,試驗(yàn)同時(shí)比較了用0,0. 05,0. 075.0. 1,0. 15 mol/L .丙酮:分析純,國(guó)藥集團(tuán);磷酸二氫鉀溶液為流動(dòng)相的分離效果并調(diào)節(jié)與乙腈的比例，氯甲酸芴甲脂(FMOC- CI)術(shù)生劑:美國(guó)Fluka公司;最終確定以0. 075 mol/L磷酸二氫鉀溶液'乙腈= 96:4為聚丙烯酰胺(含量≥85.0% ,平均分子量≥300萬(wàn)):國(guó)藥流動(dòng)相,流速為1.0 mL/min,柱溫為30 C ,在該條件下驟丙集團(tuán);烯酰胺衍生產(chǎn)物與雜質(zhì)能有效分離并具有良好的靈敏度.聚丙烯酸鈉(固含量≥40.0%,分子量≥3X10'):國(guó)藥采用Waters2475 熒光檢測(cè)器掃描后發(fā)現(xiàn)在激發(fā)波長(zhǎng)集團(tuán)。268 nm.發(fā)射波長(zhǎng)315 nm處,聚丙烯酰胺衍生產(chǎn)物具有最1.2 方法大響應(yīng)值(見(jiàn)圖1,圖2)。水、聚丙烯酸鈉和聚丙烯酸鈉添加1.2.1聚丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液準(zhǔn)確稱取 20.0 mg聚丙烯酰聚丙烯|酰胺的街生物分離譜圖見(jiàn)圖3.胺標(biāo)準(zhǔn)品,加入80 ml.水,超聲30 min, 放置過(guò)夜,用水定容2 00.00至100 mL,混合擁勻,準(zhǔn)確移取適最標(biāo)準(zhǔn)貯備液,用水稀釋.268成4~400 pg/ml.的標(biāo)準(zhǔn)系列。100001.2.2樣品處理方法 稱取0, 200~0.500 g樣品,置于100mL容量瓶中,加人80mI.水,超聲提取30min,放置過(guò)200.00 250.00300.00夜充分分散,加水定容并播勻,倒入2 mL離心管中掃描波光Wavelengh/m15000r/min離心5min,準(zhǔn)確移取400μL上清液于2mL.(a)激發(fā)光譜離心管中,依次加入200μL5%硼砂溶液和200uL1g/L氯2 00甲酸芴甲酯(FMOC CI)內(nèi)閘溶液,渦旋混勻,放置10 min,加315入500μ二氯甲烷渦旋舉取1 min,15 000 r/min 離心1 00.0.5min,吸取上.層溶液用0.45μm尼龍濾膜過(guò)濾后測(cè)試。1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)品處理方法 準(zhǔn)確移取 400山標(biāo)準(zhǔn)溶液于0300.00 350.00 400.00 450.002 ml,離心管中,加入200 μ.5%硼砂溶液和200 μL 1 g/L .氯甲酸芴甲酯(FM0C-CI)丙酮溶液,渦旋混勻,放置10 min,Wavelength/m加人500 μ二氯甲烷渦旋萃取1 min,15 000 r/min離心(b)發(fā)射光譜5min,吸取上層溶液用0.45um尼龍濾膜過(guò)濾后測(cè)試。圍1聚丙烯酰胺 標(biāo)準(zhǔn)品1.2.4液相色請(qǐng)分析條件 色 譜柱: YMC-Pack Diol 300,Figure 1 The extraction spectra5 μm, 300X8.0 mm1. D. ;柱溫:30心;熒光檢測(cè)波長(zhǎng):激發(fā)100.00波長(zhǎng)為268 nm,發(fā)射波長(zhǎng)為315 nm;進(jìn)樣量:20 μL;流速:1.0 mL/min;流動(dòng)相:0. 075 mol/L磷酸二氫鉀溶液:乙事50.00腈=96: 4;洗脫方式:等度洗脫。2結(jié)果與討 論s.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.002.1 色譜條件選擇保留時(shí)間由于聚丙烯酰胺分子量較大月極性較強(qiáng),在Cs色譜柱Relention time/min上難以保留.無(wú)法進(jìn)行有效分離檢測(cè)。有報(bào)道"采用250 x團(tuán)2聚丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜困4. 6 mm Diol 二醇基柱來(lái)檢測(cè)棗丙烯酰胺濃度,檢測(cè)波長(zhǎng)為HPI C rhromatnoram of standard sample200 nm,但在該波長(zhǎng)下,對(duì)基質(zhì)較復(fù)雜的樣品極易產(chǎn)生干擾。中國(guó)煤化工M)因此.最好能尋找到一種能與聚丙烯酰胺反應(yīng)生成穩(wěn)定熒光DYHCNMHG產(chǎn)物的試劑。FMOC-CI 和Waters accq-tag街生劑作為常用2.2“朋處璀錄什匹焊的氨居酸街生劑L0] ,能與氨基反應(yīng)生成穩(wěn)定的熒光產(chǎn)物。2.2.1提取方法 聚丙烯酸 鈉和聚丙烯酰胺均易溶于水，本試驗(yàn)參照SN/T 1923-- -2007 標(biāo)準(zhǔn)中草廿膦使用由于分子量較大,在水中的分散速度均較慢。試驗(yàn)表明經(jīng)敢74第26卷第4期黃紅霞:面粉增筋劑聚丙烯酸鈉中聚丙烯酰胺的測(cè)定置過(guò)夜后聚丙烯酸鈉和聚丙烯酰胺水溶液均成為均勻的、幾積為縱坐標(biāo) ,濃度為橫坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，得到聚丙烯酰近透明的粘稠液體。為了加快聚內(nèi)烯酰胺的溶出,采用先超胺的線性方程為A= 24 900.C+76.8,r=0.99989.檢出聲振蕩30 min再放置過(guò)夜分散的提取方法。由于聚丙烯酸限以信噪比S/N為3時(shí)對(duì)應(yīng)的目標(biāo)物依度確定,當(dāng)取樣量為.鈉和聚丙烯酰胺溶液在濃度較大時(shí)成為非常粘稠的液體,無(wú)0.2g時(shí),該方法對(duì)面粉增筋劑中 聚丙烯酰胺的檢測(cè)限為法用濾膜過(guò)濾,直接進(jìn)樣會(huì)造成色譜柱堵塞,因此,將樣品取樣量定為0. 200~0.500 g.， 50.0050.005.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00保留時(shí)間Retention time/min(a)聚丙烯酰胺衍生后未經(jīng)凈化a) HO5.0010.00 15.00 20.00 25.00 30.0Retenton timemnin(b)聚丙烯酰胺衍生后用CHCI2凈化(b)聚丙烯酸鈉(PAANa)圖4聚丙烯酰胺衍生反 應(yīng)液凈化前后液相色譜圖比較Figure 4 HPLC chromatogram of derivatizationreaction solutions of PAM2.4回收率和精 密度試驗(yàn)Relention time/mnin取空白增筋劑聚丙烯酸鈉樣品進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)添加試驗(yàn)，每個(gè)(e)聚丙烯酸鈉添加驟內(nèi)烯酰胺添加量做6個(gè)平行試驗(yàn),試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1.圈3純水、聚丙烯酸鈉空白樣 品和聚丙烯表1空白增筋劑樣品的加標(biāo)回收率和精密度Table 1 The recovery and precision in the flour gluten酰胺空白加標(biāo)液相色譜圖fortifier (PAANa) sample(n= 6)Figure 3 HPLC chromatogram of H2O (a),PAANa sample(b) and spiked舔加濃度/實(shí)測(cè)濃度/回收率/相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)sample of PAANa with PAM (c)(g.kg-1)(g.kg-")%偏差/%2.141.8385. 54. 72.2.2街生化時(shí)間和行生產(chǎn)物穩(wěn)定性 本試驗(yàn) 研究了衍生10. 709.4087. 93.8時(shí)間的選擇,發(fā)現(xiàn)衍生10,30min和24h所得聚丙烯酰胺峰42. 8038. 9090.93.高均相同,因此確定衍生時(shí)間為10min,衍生產(chǎn)物穩(wěn)定時(shí)間在24 h以上。2.5實(shí)際樣晶檢測(cè)2.2.3 凈化方法 FMOC-CI作為柱前衍生化試劑具有一采用該方法抽取面制品加工企業(yè)共計(jì)20份添加劑樣品個(gè)明顯的缺點(diǎn)就是在水溶液中過(guò)量的FMOC-CI水解成進(jìn)行了檢測(cè),共檢出了3份含聚丙烯酰胺的樣品,含載在FMOC-OH和二?；a(chǎn)物[0],對(duì)檢測(cè)構(gòu)成很大的干擾。本42%~85%之間。試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),采用二氣甲燒萃取的方法-次就能有效降低3結(jié)論過(guò)量衍生劑的干擾(見(jiàn)圖4).通過(guò)熒光街生劑氯甲酸芴甲酯(FM0C-CI)柱前衍生,高2.2.4 抗干擾能力 為檢驗(yàn)該方法的抗干擾能力,對(duì)增筋效液相色譜熒光檢測(cè)器檢測(cè).建立了面粉增筋劑聚丙烯酸鈉劑中常用的偶氮甲酰胺、活性磷酸鹽、變性淀粉、黃原膠等添中聚內(nèi)中國(guó)煤化工操作簡(jiǎn)單、抗干擾能加劑依照該方法條件進(jìn)行試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)上述添加劑均不蟛響聚力強(qiáng)、:[H.CNMHG品衛(wèi)生質(zhì)量檢驗(yàn)部丙烯酰胺的檢測(cè)。門對(duì)面材增肋則策內(nèi)儷酸鋼中策內(nèi)師酰胺的快速檢測(cè),為嚴(yán)2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 與檢測(cè)限格食品添加劑質(zhì)最監(jiān)管，保障人民健康提供了必要的技術(shù)配制4.28~428pg/mL的聚丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液,以峰面支持。(下轉(zhuǎn)第119頁(yè))75第26卷第4期梁茂文等:添加果酒復(fù)合型乳酸菌飲料的研制2.3產(chǎn)品質(zhì)量指標(biāo) .加劑,2009(1);114~117.3張學(xué)佳,紀(jì)巍,康志軍,等.橐丙烯酰胺應(yīng)用進(jìn)展[J].化工中間體，2.3.1感官指標(biāo)2008(5);34~38.產(chǎn)品呈淡黃色;具有發(fā)酵乳的乳香.南瓜蘋果的果香、以4張學(xué)佳,紀(jì)巍,康志軍，等.聚丙烯酰胺的特性及應(yīng)用[].化學(xué)工及略微的酒香,酸甜適口、質(zhì)地細(xì)膩、柔和夷口,無(wú)異味;均勻業(yè)與工程技術(shù), 2008,29(5):45~49.細(xì)膩.無(wú)分層,無(wú)凝塊。5楊文友.食品中丙烯酰膠的特性及危害[J].肉晶衛(wèi)生2002(11);2.3.2理化指標(biāo)22~26.蛋白質(zhì)含量≥1.0% ;脂肪含量≥1.0%;酸度≥70°T;酒6王茂起. GB 2760-- - 2007中華人民共和國(guó)食品添加劑衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)精度為0.6%.[S].北京:中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部, 2007.2.3.3微生物指標(biāo)? 李坤蘭.龐軍,王桂霞,等.溴氧化-可見(jiàn)光譜法測(cè)定水溶液中聚細(xì)菌總數(shù)≤100 CFU/mL;大腸菌群≤3 MPN/100 mL;丙烯酰胺含量[J].造紙化學(xué)品,999(2);8~11.3 葉美玲,韓東,施良和,等.凝膠色譜法定量分析污水中聚丙烯酰致病菌未檢出。胺[J].色譜，1995.13(1);16~19.2.3.4保質(zhì)期) 冉福強(qiáng),何建華,李睿姍,等.高效液相色譜儀檢測(cè)聚丙烯酰胺濃4 C冰箱保存21 d. .度的方法研究UJ]江漢石油科技，2006,16(2);1~4.3結(jié)論10 劉媛,謝孟峽,龍梅,等. FMOC-CI為柱前術(shù)生試劑對(duì)氨基酸的RP- HPLC定量分析方法的研究[J].現(xiàn)代儀器, 1999(6);14~(1)最優(yōu)復(fù)合果蔬汁發(fā)酵條件為:南瓜;蘋果= 1:3,接種量8%,發(fā)酵天數(shù)3d,糖度為8 Brix。(2)復(fù)合型乳酸菌飲料的最佳配方為;酸奶32. 0%復(fù)11 李波. SN/T 1923- 2007進(jìn)出口食品中草甘腆殘留量液相色譜一質(zhì)譜/質(zhì)譜法[S].北京:中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢合發(fā)醇果汁8.0%、蔗糖10.0%、復(fù)合酸(檸檬酸:蘋果酸:驗(yàn)檢疫總局,007.Vc= 8:10.5)0.14% ,復(fù)合穩(wěn)定劑(CMC:黃原膠= 2:1)12 Waters中國(guó)有限公司。Wates液相色譜通訊- AccQ. Tag專集0.30%.產(chǎn)品呈淡黃色,口感細(xì)膩.潤(rùn)滑,并具南瓜蘋果香、[M].北京:沃特斯中國(guó)有限公司,1997.酒香及奶香等多種特殊香味。信息窗參考文獻(xiàn)1王洪偉,徐雅琴. 南瓜功能成分研兗進(jìn)展[J].食品與機(jī)械2004,研究人員發(fā)現(xiàn)-些腸道細(xì)菌20(4).55~57.可產(chǎn)生減肥效果2丁云花. 南瓜的食療保健價(jià)值及開發(fā)前最[J].中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng)，1998(6) :49.比利時(shí)研究人員近期研究發(fā)現(xiàn).益生菌等一些腸道3張紅印,王蘭.南瓜蘋果復(fù)合果蔬汁飲料的研究[J].鄭州糧食學(xué)細(xì)菌能影響人們的食欲和新陳代謝。人們今后可以通過(guò)院學(xué)報(bào),2001(3) :58~59.4胡亞平,秦丹,李清明.黃瓜圣女果復(fù)合汁乳酸發(fā)酵飲料的研制定期服食特定食品或食晶添加劑,通過(guò)調(diào)節(jié)腸道內(nèi)的細(xì)菌種類和數(shù)量,達(dá)到控制體重的目的。[J]. 食品與機(jī)械，006.22<2)250~52.魯汶天主教大學(xué)的研究人員通過(guò)多年的研究發(fā)現(xiàn),5盧蓉蓉,楊毅,楊瑞金. 胡夢(mèng)卜計(jì)乳酸菌飲料的加工工藝[J].食品.某些腸道細(xì)黹在腸道里控制眷內(nèi)大麻醇的產(chǎn)生,而內(nèi)大與機(jī)械,2006 ,2(4);106~ 108.111.16李紅梁,黃俊榮 ,禹露.食品添加劑對(duì)乳酸菌飲料穩(wěn)定性及口感的麻醇可以影響?zhàn)囸I感和脂肪細(xì)胞里脂肪的堆積程度。研究人員把實(shí)驗(yàn)鼠分為兩組:一組食物里加人益生影嘲[J].食品工業(yè),2004(6);39. ,7劉鐵鋼,趙志新，趙風(fēng)蘭. 飲料質(zhì)量檢驗(yàn)[M].北京:中國(guó)計(jì)量出版菌,另一組則不添加作為對(duì)照組。喂養(yǎng)-段時(shí)間后,研究社,1998.213~230.人員對(duì)兩組實(shí)驗(yàn)鼠的有關(guān)肥胖指標(biāo)進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),益生8周玉珠.正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)的矩陣分析方法[J].數(shù)學(xué)的實(shí)踐與認(rèn)識(shí)，菌蟛響實(shí)驗(yàn)鼠的內(nèi)大麻醇系統(tǒng)。也就是說(shuō),喂食益生菌2009<2) :202~207.的實(shí)驗(yàn)鼠身體比較“苗條"。研究人員表示，如果這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)在人身上得到驗(yàn)證,那么體重超標(biāo)的人今后只要服用添加腸道細(xì)菌的特定(上接第75頁(yè))中國(guó)煤化工目的。子系統(tǒng)生物學(xué)>雜1徐丹,董學(xué)亮 ,劉明，等.聚丙烯酸鈉增樹劑的特性及用途[J].河志上MHCNMHG南科學(xué)，2005,23(6):810~812.(來(lái)源:新華網(wǎng))2周宇光,付國(guó)平.食用聚丙烯酸鈉的特性及應(yīng)用[J].中國(guó)食品添119