16中藥與臨床 Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica2015;6(l)炮制制烏芍止癢顆粒提取工藝、濃縮工藝及干燥工藝研究郭志燁,楊明,韓麗,劉李梅,梅明,鄒文銓3摘要]目的:優(yōu)選中藥復方制劑烏芍止癢顆粒的提取工藝、濃縮工藝、干燥工藝。方法:采用正交試驗法,以二苯乙烯苷、梣桐的含量以及干膏得率作為評價指標,考察乙醇濃度、乙醇用量、提取時間、提取次數(shù)4個因素,并結合綜合評分的方法優(yōu)選出烏芍止癢顆粒的提取工藝。以二笨辶烯苷、梣桐的含量作為評價指標,對常用的濃縮方法、干燥方法進行比較,優(yōu)選出烏芍止癢顆粒的濃縮工藝、干燥工藝。結果:最佳提取工藝為加12倍量60%的乙醇,回流提取3次,每次Ih;最佳濃縮工藝為減壓濃縮(溫度60℃,真空度008~0.09MPa);最佳千燥工藝為減壓干燥(溫度60℃,真空度008-009MPa)。結論:優(yōu)選出的烏芍止癢顆粒的提取工藝、濃縮工藝、干燥工藝穩(wěn)定可行、科學合理,可用于工業(yè)化大生產(chǎn)[關鍵詞]制何首烏;白鮮皮;正交試驗;提取工藝;濃縮工藝;干燥工藝[中圖分類號]R283文獻標識碼]A[文章編號]1674926X(2015)01-00404Research of extraction technology, concentration technology and drying technology of Wuyao Zhiyang granules/GUO Zhi-ye, YANG Ming",HAN Li, LIU Li-mei, MEI Ming, ZHOU Wen-quan (l. Pharmacy College, Chengdu Universityof Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine,Key laboratory of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources in Sichuan Province-KeyLaboratory Breeding Base of Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, Sichuan; 2. Key Laboratory of ModernPreparation of TCM, Ministry of Education, Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang, Jiangxi 330004Jiangxi; 3. Sichuan University, Chengdu, Sichuan 610064, China)[Abstract] Objective: To optimize the extraction technology, concentration technology and drying technology of WuyaoZhiyang Granules. Method: The orthogonal test was used. Stilbene glucoside content, fraxinellone content and dry extract yieldwere used as indexes to optimize ethanol concentration, ethanol volume, extraction time and times. and comprehensive evaluatiowas used to optimize the extraction process of Wuyao Zhiyang Granules. the contents of stilbene glucoside and fraxinellone wereused as indexes for optimizing the concentration technology and drying technology of Wuyao Zhiyang Granules.Result: Theoptimal ethanol extraction technology was adding 12 times of 60% ethanol for 3 times and extracting for Ih each time. The optimconcentration technology and drying technology was vacuum concentration and vacuum drying with temperature of 60"C andacuum of 0.08-0.09MPa, Conclusion: The optimized extraction technology, concentration technology and drying technologyre stable, feasible, scientific, reasonable and suitable for production[Key words] Prepared Heshouwu; Baixianpi; orthogonal test; extraction technology; concentration technology; dryingechnology[基金項目四川省科技支撐項目(2014S20071-09)鳥芍止癢顆粒是由制何首烏、白鮮皮等多種中[作者單位]1成都中醫(yī)藥大學中藥材標準化教育部重點實驗室四川省中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用重點實驗藥組成,具有滋陰潤燥,養(yǎng)血祛風的功效,主治血室——省部共建國家重點實驗室培育基地,四虛型老年皮膚瘙癢癥。制何首烏補肝腎,益精血,養(yǎng)川成都611372江西中醫(yī)藥大學現(xiàn)代中藥制血滋陰,為滋補良藥,重用制何首烏以治其本,寓劑教育部重點實驗室,江西南昌330004;3四川大學,四川成都610064治風先治血”之意,實為君藥。白鮮皮清熱解毒兼作者簡介郭志燁(1988,女(漢族),藥劑學碩士,從事中藥以祛濕殺蟲,祛風止癢,實為臣藥?，F(xiàn)代藥理研究新技術、新工藝、新制劑研究表明何首烏中的主要有效成分二苯乙烯苷是一種較Tel(028)61800127Emailguozhiyejiayou@163.com強的抗氧化劑,能起到抗衰老、提高免疫功能、防[通訊作者]楊明,男,教授,博士生導師,從事中藥新劑型與新技術、中藥復方釋藥系統(tǒng)研究治動脈硬化TV中國煤化立烏功效十分吻Te(0791)711658 Email: yangming 16@26com合2,同時CNMHG征性成分,能韓麗,女,教授,碩士生導師,從事中藥新技排除復方中其他成分十擾且含量較高?，F(xiàn)代藥理研術、新工藝、新制劑研究Tel:(02861800127Email:hanliyx@163.com究表明白鮮皮中的主要有效成分梣桐是一種較強的收稿日期]20140613中藥與臨床 Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica2015;6(1)抗炎劑,能起到保肝、殺蟲、抑菌、止癢等作用,度與峰面積呈良好的線性關系與白鮮皮功效十分吻合;同時梣桐是白鮮皮特征2.1.4供試品溶液制備稱取2個處方量藥材,加入6性成分,能排除復方中其他成分干擾且含量較高。倍量60%乙醇回流提取3次,每次lh,過濾,合并提干膏得率是固體復方制劑劑型選擇的主要依據(jù)。故取液,精密移取2mL,加60%乙醇稀釋并定容至10本課題以二苯乙烯苷、梣桐的含量和干膏得率作為mL棕色容量瓶中,搖勻,取上清液過0.45μm微孔濾評價指標,用正交試驗法優(yōu)選制何首烏、白鮮皮等膜,取續(xù)濾液即得。的乙醇回流提取工藝,并以二苯乙烯苷、梣桐的含2.1.5陰性對照溶液的制備按處方比例稱取除制何量和轉(zhuǎn)移率為評價指標,優(yōu)選復方提取液的濃縮、首烏外的其余藥材,按照“2.14”項下制備陰性對照干燥工藝,使各工藝穩(wěn)定可行、科學合理,并適用溶液。于工業(yè)化大生產(chǎn),從而更好的控制烏芍止癢顆粒的2.1.6專屬性試驗按照“2.11項下方法,分別精密質(zhì)量,保證其療效。吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各101儀器與試藥μL進樣分析。發(fā)現(xiàn)在二苯乙烯苷對照品出峰的位置上,陰性對照溶液無相應色譜峰出現(xiàn),說明樣品中儀器: Agilent1260LC高效液相色譜儀(美其他成分對二苯乙烯苷的含量測定不產(chǎn)生干擾,試國安捷倫公司);BP211D電子分析天平(德國驗結果見圖1。sartorius);電子恒溫水浴鍋(北京中興偉業(yè)儀器有限公司);RE52CS旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮有限公司);SHHX恒溫循環(huán)烘干箱(上海蘇昊電器有限公司);DZF6030真空干燥箱(上海風棱實驗設備有限公司)試藥:二苯乙烯苷對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110844201109);梣桐對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:11000602);HPLC分析用乙腈、甲醇為色譜純(上海安譜科學儀器有限公司);超純水( Millipore超純水凈化系統(tǒng)制圖1對照品溶液(A)、復方供試品溶液(B)及陰性對照溶液得);乙醇為分析純(成都市科倫化工試劑廠)。(C)的HPLC色譜圖(1二苯乙烯苷)2方法與結果21.7精密度試驗分別精密吸取二苯乙烯苷對照品21二苯乙烯苷含量測定方法溶液10μL,連續(xù)進樣6次,記錄峰面積值,計算二苯2.1.1色譜條件色譜柱為 Kromasil100-5Cs柱<烯苷峰面積RSD為0.26%,說明儀器精密度良好。2.1.8穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液于室溫下放(250*46mm,5μm);流動相為乙腈-水(25:75,置,于0,2,4,6,8,10h分別進樣10μ,記錄峰vv);檢測波長為320nm;柱溫為30℃;進樣量為10uL1面積值,結果二苯乙烯苷峰面積RSD為0.90%,說明21.2對照品溶液制備精密稱取二苯乙烯苷對照品樣品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定性良好。適量置50mL棕色容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻2.1.9重復性試驗稱取1個處方量藥材6份,按照度,搖勻,即得濃度為01040mgmL的對照品母2.14項下方法制備供試品溶液,記錄峰面積值,液。計算二苯乙烯苷的含量,結果RSD為1.73%,說明該2.1.3線性關系考察分別精密量取1、2、3、4、5、方法重復性良好。6mL對照品母液置10mL棕色容量瓶中,加甲醇稀釋2.1.10加樣回收試驗稱取0.5個處方量藥材6份,分并定容至刻度,搖勻。分別精密吸取10μ按“2.1.1別加入二苯乙烯苷對照品,按樣品溶液制備方法處項下HPLC條件,進樣分析。以對照品濃度(X)對理,進行質(zhì)中國煤化工收率,結果二峰面積(Y)作圖,得到標準曲線圖。其回歸方程苯乙烯苷平CNMHG168%,說明該為:Y=24.3000X+52330,r=0.9999,n=6。說明在方法準確度良好。1040~96240ugmL范圍內(nèi),二苯乙烯苷對照品濃22梣桐含量測定方法2.2.1色譜條件色譜柱為 Kromasil100-5C1柱18·中藥與臨床 Pharmacy and Clinics of chinese Materia Medica205.6()(250*46mm,5μm);流動相為甲醇-水(60:40,面積值,結果梣桐峰面積RSD為0.31%,說明樣品溶v/v);檢測波長為236nm;柱溫為30℃;進樣量為液在10h內(nèi)穩(wěn)定性良好。2.2.9重復性試驗稱取1個處方量藥材6份,按照2.2.2對照品溶液制備精密稱取梣桐對照品適量“2.2.4”項下方法制備供試品溶液,記錄峰面積值置100mL容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,搖計算梣桐的含量,結果RSD為198%,說明該方法重勻,即得濃度為00615mgmL的對照品母液。復性良好。2.2.3線性關系考察分別精密量取1、2、3、4、5、2.2.10加樣回收試驗稱取0.5個處方量藥材6份,分6mL對照品母液置l0mL容量瓶中,加甲醇稀釋并別加入二苯乙烯苷對照品,按樣品溶液制備方法處定容至刻度,搖勻。分別精密吸取10μL按“2.2.1”理,進行質(zhì)量濃度測定,計算加樣回收率,結果梣項下HPLC條件,進樣分析。以對照品濃度(X)對桐平均回收率1017%,RSD為1.3%,說明該方法準峰面積(Y)作圖,得到標準曲線圖。其回歸方程確度良好。為:Y=15.5415X+1.1200,r=0.9997,n=6。說明在2.3醇提工藝考察6.15~36.90μgmL范圍內(nèi),梣桐對照品濃度與峰面2.31浸泡時間及吸液率的考察按處方比例稱取藥積呈良好的線性關系。材共50g,加入500mL的60%乙醇,浸至藥材全部透2.24供試品溶液制備稱取2個處方量藥材,加入6心(計時約為60min,濾過,收集濾液,計算藥材的倍量60%乙醇回流提取3次,每次1h,過濾,合并提吸液率為114%mlg),因此確定在首次提取時應多加取液,精密移取5mL,加60%乙醇稀釋并定容至101倍量的溶劑,浸泡60min后開始提取。mL容量瓶中,搖勻,取上清液過045μm微孔濾膜,232提取正交試驗設計烏芍止癢顆粒中制何首烏取續(xù)濾液即得。的主要藥效成分是二苯乙烯苷、蒽醌等,白鮮皮主22.5陰性對照溶液的制備按處方比例稱取除白鮮要藥效成分是白蘚堿、梣桐、黃柏酮等,經(jīng)查閱文皮外的其余藥材,按照“2,2.4”項下制備陰性對照溶獻和預試驗,依據(jù)其主要藥效成分的理化性質(zhì),采液用一定濃度的乙醇回流提取。按照處方比例稱取9份2.2.6專屬性試驗按照¨2.1.1ν項下方法,分別精密藥材,對乙醇濃度、乙醇用量、提取時間、提取次吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10數(shù)四個因素進行L(3)正交試驗,制備樣品溶液,因μ進樣分析,發(fā)現(xiàn)在梣桐對照品出峰的位置上,陰素水平見表1。性對照溶液無相應色譜峰出現(xiàn),說明樣品中其他成表1因素與水平表分對梣桐的含量測定不產(chǎn)生干擾,試驗結果見圖2。水平A乙醇濃度B溶劑用量C提取時間D提取次數(shù)(倍)0.5A102.3.3樣品含量測定按L4(3)正交表進行試驗,分別精密移取“2.3.2項下各提取液適量,置10mL容量瓶B中,加60%乙醇至刻度,搖勻,即得供“二苯乙烯苷含量測定”、“梣桐含量測定”的樣品溶液。101214161820234干膏收率測定按L(3)正交表進行試驗,分別U/min量取提取液適量,置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中,水圖2對照品溶液A、復方供試品溶液B及陰性對照溶液浴濃縮至干,置105℃烘箱中干燥3h,取出,于干燥C的HPLC色譜圖(1梣桐器中冷卻30min,迅速精密稱定其重量,計算干膏得2.27精密度試驗分別精密吸取梣桐對照品溶液10率。中國煤化工μ,連續(xù)進樣6次,記錄峰面積值,計算梣桐峰面積2.3.5正交i定二苯乙烯苷CNMHGRSD為0.13%,說明儀器精密度良好。梣桐含量以平旱,丌不用繡亡評分(綜合評分228穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液于室溫下放〓二苯乙烯苷含量/二苯乙烯苷最高含量×0.45×-100-梣置,于0,2,4,6,8,10h分別進樣10μL,記錄峰桐含量梣桐最高含量×045×100千膏收率/干青最高中藥與臨床 Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica2015;6(1)19收率×0.10×100)進行評價,試驗結果見表2、表3。表2正交試驗設計及結果(3)因素試驗號干膏得率(%)二苯乙烯苷含量(mgg)樺桐含量(mgg)綜合評分17.198.82000608325.542.511228.65124180.9612996721281208490.934394640.8628813318.1811.101808724871215.578291216.189.1335091277116808100K25848243.75234.5521526263.09255.17254.982626426391275.54189.46227.445671.474表3綜合評分方差分析24濃縮工藝考察方差來源離差平方和自由度均值P值稱取20個處方量藥材,按確定的提取工藝進89.46294.7316903行提取,提取液分成等量的4份,其中兩份采用常50.944671.4742222754725.500壓法濃縮;另外兩份采用減壓法(溫度60℃,真空33573724466<0.05度0.08~0.09MPa)濃縮。在濃縮至相對密度約為2744513.72212060℃)時取樣檢測,結果見表5。注:P<0.05表示有顯著性差異,<0.01表示有極顯著性差異表5濃縮工藝考察結果從綜合評分方差分析結果可看出,提取次數(shù)濃縮方法二苯乙烯苷二苯乙烯苷彬桐含量桐轉(zhuǎn)移率D)對干膏得率、二苯乙烯苷和梣桐的提取有含量(mgg)轉(zhuǎn)移率(%)(mgg)c)顯著影響,為主要因素;乙醇濃度(A)、提取常壓濃縮8338709185時間(C)和溶劑用量(B)對提取的影響不大,減壓濃縮1081759421091589630為次要因素,結合直觀分析,各因素作用主次為試驗結果表明,濃縮方法對提取液中桐含量D>A>C>B,且D2>D2>D1,A2>A1>A3,C3>C2>C1,影響不大,但是對二苯乙烯苷含量影響較大,其中B2>B3>B1?？紤]到工業(yè)生產(chǎn)成本,綜合比較后確定減壓濃縮優(yōu)于常壓濃縮,所以綜合評價最終采用減最佳醇提工藝為A2B2C2D3,即8倍量60%乙醇,回流壓濃縮(溫度60℃,真空度0.08-0.09MPa)作為本課提取3次,每次10h。題的濃縮工藝236驗證試驗根據(jù)以上試驗結果,對優(yōu)選出來的最佳25千燥工藝考察提取工藝條件AB2CD2進行驗證試驗,重復3次,測定稱取20個處方量藥材,按確定的提取工藝、濃二苯乙烯苷、梣桐的含量以及干膏得率,結果見表4?？s工藝進行提取和濃縮,濃縮液平均分成4份,其表4提取工藝驗證結果中兩份置于恒溫循環(huán)烘干箱(溫度60℃)中常壓干編號二苯乙烯苷含量mgg)梣桐含量(mgg)干膏收率(%)燥,另外兩份置于真空干燥箱(溫度60℃,真空度11.75500.94080.08~009MPa)中減壓干燥,結果見表6。11.73720.9399表6干燥工藝考察結果12.07970.929921.25干燥干燥V凵中國煤化工烯書糊含量銅轉(zhuǎn)均值11.85730.93692141方法時間CNMHG((mg/g)試驗結果表明,優(yōu)選的提取工藝穩(wěn)定可行,重常壓干燥4h青體較硬74968025628808019復性好。減壓干燥2體松7241952879080681(下轉(zhuǎn)第24頁)中藥與臨床 Pharmacy and Clinics of Chinese Materia medica2015:6(1)[3]國家藥典委員會中華人民共和國藥典(一部S北京中國臨床20134(3:14醫(yī)藥科技出版社,2010:124[9]鄭維兵HPLC法測定歸芪生血顆粒中阿魏酸的含量門海峽[4]謝玲楊凌紅,李曉慧當歸藥理作用研究進展[門中醫(yī)藥研藥學2013,25(08):88究,2000166:56[10]賁永光李坤平李康等正交設計白芍總苷的超聲提取工[5]葉娟,高文遠劉新橋等白芍配方顆粒制備工藝優(yōu)化及質(zhì)量藝門食品與生物技術學報2009,28(4)501控制門中國藥房,2007,18(9):660陳象青劉圣方炎等多指標正交優(yōu)選當歸提取工藝[中[6]蔣偉王長虹王錚濤當歸提取物的制備工藝及其質(zhì)量控制國實驗方劑學雜志,2010,16(8)25[華西藥學雜志2010,25(187[12]呼梅安小梅,盧云正交試驗法優(yōu)選麻桔喘咳口服液的提[7甘井山鄒愛英劉瑩等,高相液相色譜法測定接骨片中阿魏取工藝[中國醫(yī)院藥學雜志,2014,34(02):113.酸和芍藥苷J現(xiàn)代藥物與臨床,2013,28(3):347(責任編輯:何瑤)[8]王芳鄭琰談靜,等調(diào)經(jīng)止痛膠囊提取工藝研究[J中藥與(上接第19頁)試驗結果表明,干燥方法對濃縮液中梣桐含量的速率越快,60℃及以下溫度對二苯乙烯苷質(zhì)量濃影響不大,但是對二苯乙烯苷含量影響較大,其中度影響較小(具體研究內(nèi)容將另文發(fā)表)。故根據(jù)減壓干燥優(yōu)于常壓干燥。此外減壓時間較短,所得上述研究結果在本試驗中有關二苯乙烯苷的含量測干燥物的性狀較好,所以綜合評價最終采用減壓干定項均釆用避光操作;提取時對水浴鍋溫度進行控燥(溫度60℃,真空度0.08~0.09MPa)作為本課題的制,使其滿足提取溶劑沸騰即可;減壓濃縮、減壓千燥工藝干燥的溫度控制在60℃。33本課題釆用多指標綜合評價的方法對復方中藥制3小結劑烏芍止癢顆粒的提取工藝、濃縮工藝、干燥工藝31中藥復方制劑的制備工藝直接影響制劑質(zhì)量和臨進行考察,優(yōu)選的工藝穩(wěn)定可行,為其工業(yè)化大生床療效,因此對中藥復方制劑制備工藝的考察極為產(chǎn)奠定了基礎。重要。但是中藥復方成分復雜,且制劑的療效是各成分共同發(fā)揮作用產(chǎn)生,因此本課題對制備工藝的[參考文獻]考察均采用多指標綜合評價。提取工藝考察中,[高淑紅蘇珍枝肖學鳳制首烏化學成分及藥理作用研究進苯乙烯苷、梣桐均為主要藥效成分,因此綜合評分展團山西中醫(yī)學院學報,2012,13(2)14權重系數(shù)設定為045,干膏得率對療效影響較小,是2顧慧呂圭源陳素紅何首烏補肝腎、益精血、強筋骨”功服用劑量、劑型等確定的依據(jù),因此綜合評分權重效相關的藥理研究[世界科學技術,2008,102:58[3]時東方宋策鄭梅竹等白鮮皮抗炎有效組分的分離及抗炎系數(shù)設為01。活性研究[J抗感染藥學,2008,2236):2132在試驗中發(fā)現(xiàn)二苯乙烯苷具有較強的光、熱不穩(wěn)[4張麗娟賈俊,王小煥等克銀丸質(zhì)量控制方法研究現(xiàn)代定性,并對其進行了研究。研究結果表明液體狀態(tài)儀器,2012,18(2)39的二苯乙烯苷在紫外光照條件下不穩(wěn)定,隨著光照國家藥典委員會中華人民共和國藥典(一部川S北京:中國時間的增加,發(fā)生轉(zhuǎn)化反應,即由反式二苯乙烯苷醫(yī)藥科技出版社,2010:296.轉(zhuǎn)化為順式二苯乙烯苷,且最大吸收波長由320m紫伍小燕黃權芳唐愛存正交試驗法優(yōu)選益腎青滋制備工藝移到285nm;液體狀態(tài)的二苯乙烯苷在髙溫條件下不中國實驗穩(wěn)定,隨著溫度的升高,二苯乙烯苷質(zhì)量濃度減小H中國煤化工CNMHG王編輯:胡慧玲)